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 做为Viva Bioscience的一级代理商,竭诚为您服务!

Viva Bioscience品牌简介:上海莼试生物技术有限公司专业经营生科研化试剂、分析试剂 , 代理 许多国际先进水平的高科技产品,包括分子生物学、细胞生物学、免疫学、诊断等多个研究及应用领域。我们努力将欧美专业生产厂家的具有国际先进水平的产品推荐给各类研究人员;另一方面也非常重视自主产品研究和开发,推出了一系列具有竞争力的产品和服务。同时国家对于生物行业的发展给予了极大的重视,更多地侧重于科研的投入。

Viva Bioscience实验方法1:1.1 药敏片的制备:一般情况下,可以从厂家获取。如无法获取,可以自行制备。首先,新华号定性滤纸,用内径为6mm的打孔器制备好纸片,按每包100片包装好,高压灭菌,烘干备用。然后,将待检药物用蒸馏水按实际用量的10倍稀释,充分溶解后,取1mL加到100片灭菌好的纸片上,放入4℃冰箱,待其充分吸收后(一般要4-8小时),平铺于平皿上,在37℃温箱中充分烘干(2-810小时),干燥后立即封装于灭菌的小瓶内,密闭保存。

Viva Bioscience品牌涉及领域:【生物分子】 抗生素/抗真菌素 维生素 氨基酸 核苷酸 脂 糖类 白三烯 前列腺素 药物结合物 抗氧化剂 药理活性化合物 类固醇激素结合物 半抗原反应 半抗原载体结合物 放射性核素 血小板活化素 tRNA 活性染料和化合物 亲和素/链霉亲和素

【蛋白质/抗原/多肽】 免疫球蛋白 封闭肽 人蛋白和抗原 小鼠蛋白和抗原 细菌蛋白和抗原 病毒蛋白和抗原 植物蛋白和抗原 其它蛋白和抗原 细胞质蛋白 总蛋白 膜蛋白 核蛋白 细胞裂解和提取物 线粒体蛋白 细胞裂解 组织提取 重组细胞因子 其它

【常用生化试剂】EDTA DTT Tris SDS MOPS HEPES 水 分子生物学缓冲液 蛋白生化缓冲液 去垢剂 染色试剂 溶剂 酸碱 化学试剂 其它生化试剂

【PCR/RT-PCR/qPCR】PCR试剂 PCR对照 特异性PCR试剂盒 PCR克隆试剂盒 RNA 载体及构建 PCR克隆载体 M13克隆载体 细菌克隆载体 文库及构建 cDNA文库 基因组文库 噬菌体展示文库

【酶】限制性内切酶 蛋白酶 核酸酶 激酶 聚合酶 连接酶

【cDNA及合成纯化】cDNA全长基因 RNA cDNA合成 cDNA相关试剂

【核酸/蛋白合成】Oligo纯化 核酸合成柱 核酸合成试剂

【克隆与表达】克隆基因 克隆试剂盒 克隆筛选

【表达分析】 Northern印迹分析 分支DNA和mRNA定量

【蛋白分析】 PAGE凝胶制备 蛋白电泳试剂 预制蛋白凝胶

【核酸纯化】 DNA凝胶纯化 DNA提取纯化 PCR产物纯化

【RNAi技术】 siRNA 反义寡核苷酸 RNAi定量 RNAi文库

【蛋白检测】 Western印迹 报告基因检测 蛋白检测试剂盒

【实验动物】 转基因动物 小鼠 大鼠 模式动物

【临床检测试剂】 生化检测 遗传学检测 血液检测

【相关检验试剂】 食品安全检测 药品安全检测

【蛋白纯化】 蛋白提取 蛋白透析 蛋白定量 蛋白稳定

【细胞培养】 血清 血清替代物 细胞培养基 细胞 细胞株 感受态细胞 新鲜细胞分离

【干细胞】 干细胞/祖细胞 原代细胞 干细胞培养基

【蛋白修饰】 蛋白标记 载体蛋白结合 其它

【细胞生物学检测】 细胞凋亡 细胞分离 细胞增殖

【药物筛选】 荧光素细胞活力/增殖/毒性检测

【免疫检测】 放射性免疫检测 化学发光免疫检测

Viva Bioscience授权代理使用方法2:1.2 培养基的制备:用托盘天平称取营养琼脂4克,加入洁净的容器内,再用量筒加入200mL蒸馏水,121℃,灭菌20分钟。灭菌后,冷却至50-60℃,在超净台内,迅速将培养基倒入灭菌的培养皿内,每个平皿15mL左右,轻摇平皿,使培养基分布均匀。待其冷却凝固后,即可使用,或放入810℃冰箱备用。



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做为Vitrolife的一级代理商,竭诚为您服务!

Vitrolife品牌简介:上海莼试生物技术有限公司专业经营生科研化试剂、分析试剂 , 代理 许多国际先进水平的高科技产品,包括分子生物学、细胞生物学、免疫学、诊断等多个研究及应用领域。我们努力将欧美专业生产厂家的具有国际先进水平的产品推荐给各类研究人员;另一方面也非常重视自主产品研究和开发,推出了一系列具有竞争力的产品和服务。同时国家对于生物行业的发展给予了极大的重视,更多地侧重于科研的投入。

Vitrolife实验方法1:1.1 药敏片的制备:一般情况下,可以从厂家获取。如无法获取,可以自行制备。首先,新华号定性滤纸,用内径为6mm的打孔器制备好纸片,按每包100片包装好,高压灭菌,烘干备用。然后,将待检药物用蒸馏水按实际用量的10倍稀释,充分溶解后,取1mL加到100片灭菌好的纸片上,放入4℃冰箱,待其充分吸收后(一般要4-8小时),平铺于平皿上,在37℃温箱中充分烘干(2-810小时),干燥后立即封装于灭菌的小瓶内,密闭保存。

Vitrolife品牌涉及领域:【生物分子】 抗生素/抗真菌素 维生素 氨基酸 核苷酸 脂 糖类 白三烯 前列腺素 药物结合物 抗氧化剂 药理活性化合物 类固醇激素结合物 半抗原反应 半抗原载体结合物 放射性核素 血小板活化素 tRNA 活性染料和化合物 亲和素/链霉亲和素

【蛋白质/抗原/多肽】 免疫球蛋白 封闭肽 人蛋白和抗原 小鼠蛋白和抗原 细菌蛋白和抗原 病毒蛋白和抗原 植物蛋白和抗原 其它蛋白和抗原 细胞质蛋白 总蛋白 膜蛋白 核蛋白 细胞裂解和提取物 线粒体蛋白 细胞裂解 组织提取 重组细胞因子 其它

【常用生化试剂】EDTA DTT Tris SDS MOPS HEPES 水 分子生物学缓冲液 蛋白生化缓冲液 去垢剂 染色试剂 溶剂 酸碱 化学试剂 其它生化试剂

【PCR/RT-PCR/qPCR】PCR试剂 PCR对照 特异性PCR试剂盒 PCR克隆试剂盒 RNA 载体及构建 PCR克隆载体 M13克隆载体 细菌克隆载体 文库及构建 cDNA文库 基因组文库 噬菌体展示文库

【酶】限制性内切酶 蛋白酶 核酸酶 激酶 聚合酶 连接酶

【cDNA及合成纯化】cDNA全长基因 RNA cDNA合成 cDNA相关试剂

【核酸/蛋白合成】Oligo纯化 核酸合成柱 核酸合成试剂

【克隆与表达】克隆基因 克隆试剂盒 克隆筛选

【表达分析】 Northern印迹分析 分支DNA和mRNA定量

【蛋白分析】 PAGE凝胶制备 蛋白电泳试剂 预制蛋白凝胶

【核酸纯化】 DNA凝胶纯化 DNA提取纯化 PCR产物纯化

【RNAi技术】 siRNA 反义寡核苷酸 RNAi定量 RNAi文库

【蛋白检测】 Western印迹 报告基因检测 蛋白检测试剂盒

【实验动物】 转基因动物 小鼠 大鼠 模式动物

【临床检测试剂】 生化检测 遗传学检测 血液检测

【相关检验试剂】 食品安全检测 药品安全检测

【蛋白纯化】 蛋白提取 蛋白透析 蛋白定量 蛋白稳定

【细胞培养】 血清 血清替代物 细胞培养基 细胞 细胞株 感受态细胞 新鲜细胞分离

【干细胞】 干细胞/祖细胞 原代细胞 干细胞培养基

【蛋白修饰】 蛋白标记 载体蛋白结合 其它

【细胞生物学检测】 细胞凋亡 细胞分离 细胞增殖

【药物筛选】 荧光素细胞活力/增殖/毒性检测

【免疫检测】 放射性免疫检测 化学发光免疫检测

Vitrolife授权代理使用方法2:1.2 培养基的制备:用托盘天平称取营养琼脂4克,加入洁净的容器内,再用量筒加入200mL蒸馏水,121℃,灭菌20分钟。灭菌后,冷却至50-60℃,在超净台内,迅速将培养基倒入灭菌的培养皿内,每个平皿15mL左右,轻摇平皿,使培养基分布均匀。待其冷却凝固后,即可使用,或放入810℃冰箱备用。


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做为warner的一级代理商,竭诚为您服务!

warner品牌简介:

上海莼试生物技术有限公司专业经营生科研化试剂、分析试剂 , 代理 许多国际先进水平的高科技产品,包括分子生物学、细胞生物学、免疫学、诊断等多个研究及应用领域。我们努力将欧美专业生产厂家的具有国际先进水平的产品推荐给各类研究人员;另一方面也非常重视自主产品研究和开发,推出了一系列具有竞争力的产品和服务。同时国家对于生物行业的发展给予了极大的重视,更多地侧重于科研的投入。

公司的理念是:以诚信为本,努力打造优质品牌,为您提供全方位的售中、售后服务.       warner实验方法1:1.1 药敏片的制备:一般情况下,可以从厂家获取。如无法获取,可以自行制备。首先,新华号定性滤纸,用内径为6mm的打孔器制备好纸片,按每包100片包装好,高压灭菌,烘干备用。然后,将待检药物用蒸馏水按实际用量的10倍稀释,充分溶解后,取1mL加到100片灭菌好的纸片上,放入4℃冰箱,待其充分吸收后(一般要4-8小时),平铺于平皿上,在37℃温箱中充分烘干(2-810小时),干燥后立即封装于灭菌的小瓶内,密闭保存。

warner品牌涉及领域:【生物分子】 抗生素/抗真菌素 维生素 氨基酸 核苷酸 脂 糖类 白三烯 前列腺素 药物结合物 抗氧化剂 药理活性化合物 类固醇激素结合物 半抗原反应 半抗原载体结合物 放射性核素 血小板活化素 tRNA 活性染料和化合物 亲和素/链霉亲和素

【蛋白质/抗原/多肽】 免疫球蛋白 封闭肽 人蛋白和抗原 小鼠蛋白和抗原 细菌蛋白和抗原 病毒蛋白和抗原 植物蛋白和抗原 其它蛋白和抗原 细胞质蛋白 总蛋白 膜蛋白 核蛋白 细胞裂解和提取物 线粒体蛋白 细胞裂解 组织提取 重组细胞因子 其它

【常用生化试剂】EDTA DTT Tris SDS MOPS HEPES 水 分子生物学缓冲液 蛋白生化缓冲液 去垢剂 染色试剂 溶剂 酸碱 化学试剂 其它生化试剂

【PCR/RT-PCR/qPCR】PCR试剂 PCR对照 特异性PCR试剂盒 PCR克隆试剂盒 RNA 载体及构建 PCR克隆载体 M13克隆载体 细菌克隆载体 文库及构建 cDNA文库 基因组文库 噬菌体展示文库

【酶】限制性内切酶 蛋白酶 核酸酶 激酶 聚合酶 连接酶

【cDNA及合成纯化】cDNA全长基因 RNA cDNA合成 cDNA相关试剂

【核酸/蛋白合成】Oligo纯化 核酸合成柱 核酸合成试剂

【克隆与表达】克隆基因 克隆试剂盒 克隆筛选

【表达分析】 Northern印迹分析 分支DNA和mRNA定量

【蛋白分析】 PAGE凝胶制备 蛋白电泳试剂 预制蛋白凝胶

【核酸纯化】 DNA凝胶纯化 DNA提取纯化 PCR产物纯化

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【实验动物】 转基因动物 小鼠 大鼠 模式动物

【临床检测试剂】 生化检测 遗传学检测 血液检测

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【蛋白纯化】 蛋白提取 蛋白透析 蛋白定量 蛋白稳定

【细胞培养】 血清 血清替代物 细胞培养基 细胞 细胞株 感受态细胞 新鲜细胞分离

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【蛋白修饰】 蛋白标记 载体蛋白结合 其它

【细胞生物学检测】 细胞凋亡 细胞分离 细胞增殖

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【免疫检测】 放射性免疫检测 化学发光免疫检测

warner授权代理使用方法2:1.2 培养基的制备:用托盘天平称取营养琼脂4克,加入洁净的容器内,再用量筒加入200mL蒸馏水,121℃,灭菌20分钟。灭菌后,冷却至50-60℃,在超净台内,迅速将培养基倒入灭菌的培养皿内,每个平皿15mL左右,轻摇平皿,使培养基分布均匀。待其冷却凝固后,即可使用,或放入810℃冰箱备用。


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      荧光分子可以说是生物学研究中最经常使用的标记分子,它们作为探针标记目标分子,可用于监测其表达量及示踪。它们相对于放射性同位素更加安全和环保,相对于不发光的标记物如HRP或金属颗粒等更加灵敏。因而应用非常广泛。下面我们将从荧光的发光原理开始,简单介绍免疫荧光(IF)和流式细胞术(FCM)的应用。

    荧光物质发光原理:光照射到某些原子时,光的能量使原子核周围的一些电子由原来的轨道跃迁到了能量更高的轨道,即从基态跃迁到第一激发单线态或第二激发单线态等。第一激发单线态或第二激发单线态等是不稳定的,瞬间将恢复基态,当电子由第一激发单线态恢复到基态时,能量会以光的形式释放,产生荧光。

   每一种荧光物质都有其特定的激发光谱(Excitation)和发射光谱(Emission)。通常以相对强度为纵轴,以波长为横轴,这些吸收光谱和发射光谱有很好的对应关系。激发光谱是固定发射光的波长,测量激发光的波长(有时候也测波数或者频率等)与荧光强度之间的关系;发射光谱是固定激发波的波长,测定发射光强度与波长的关系。荧光物质的发射波长总是大于其激发波长。 两者的差值即为斯托克斯位移。

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2019年五一国际劳动节来临之际,根据《guo务院办公厅公布2019年放假安排》,并结合公司的实际情况,现将五一节放假安排有关事宜通知如下:

劳动节放假:2019年5月1日— 2019年5月4日,共4天;                            

5月5日星期天起正常上班

调休安排:4月28日星期天上班-(补5月2日周四)

5月5日星期天上班-(补5月3日周五)



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实验室安全是一个老生常谈的话题,也是一个攸关人心的话题。实验室里有12种zui毒试剂,你都知道吗?下面我们就一起先来看看其中的6种吧。

 

1、DMSO二甲基亚砜

    DMSO是二甲基亚砜,用途广泛,用作乙炔、芳烃、二氧化硫及其他气体的溶剂以及腈纶纤维纺丝溶剂,是一种即溶于水又溶于有机溶剂的极为重要的非质子极性溶剂,对皮肤有极强的渗透性,有助于药物向人体渗透,也可作为农药的添加剂,也是一种十分重要的化学试剂。

    DMSO也是一种渗透性保护剂,能够降低细胞冰点,减少冰晶的形成,减轻自由基对细胞损害,改变生物膜对电解质、药物、毒物和代谢产物的通透性。但是研究表明,DMSO存在严重的毒性作用,与蛋白质疏水集团发生作用,导致蛋白质变性,具有血管毒性和肝肾毒性。

 

    防护措施:DMSO是毒性比较强的东西,用的时候要避免其挥发,要准备1%~5%的氨水备用,皮肤沾上之后要用大量的水洗以及稀氨水洗涤。zui为常见的为恶xing、呕吐、皮疹及在皮肤、呼出的气体中发出大蒜、洋葱、牡蛎味。


2. EB溴化乙锭

    溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂,用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。溴化乙锭用标准302nm紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号,观察琼脂糖凝胶中DNAzui常用的方法是利用荧光染料溴化乙锭进行染色。溴化乙锭是强诱变剂,具有高致癌性!会在60~70度时蒸发,所以,zuihao不要在胶太热的时候加,或者应该加到液体里,0.5μg/mL,染色半小时,当EB加得过多时,也可以在室温用水将已染色的凝胶浸泡20min以降低未结合的EB引起的背景荧光。


    防护措施:由于,溴化乙锭具有一定的毒性,实验结束后,应对含EB的溶液进行净化处理再行弃置,以避免污染环境和危害人体健康.


3.DEPC二乙基焦炭酸酯

    DEPC即二乙基焦碳酸酯(diethyl procarbonate),可灭活各种蛋白质,是RNA酶的强抑制剂,是一种潜在的致癌物质。

 

     防护措施:在操作中应尽量在通风的条件下进行,并避免接触皮肤。DEPC毒性并不是很强,但是,吸入的毒性是zui强的,使用时戴口罩。不小心占到手上注意立即冲洗。

 

4.Acrylamide丙烯酰胺

    根据香港消费者委员会的研究,含碳水化合物的食物在经油炸之后,都会产生丙烯酰胺,属中等毒性物质,可通过皮肤吸收及呼吸道进入人体,丙烯酰胺的危害主要是引起神经毒性,同时还有sheng殖、发育毒性。神经毒性作用表现为周围神经退行性变化和脑中涉及学习、记忆和其他认知功能部位的退行性变化,试验还显示丙烯酰胺是一种可能致癌物,职业接触人群的流行病学观察表明,长期低剂量接触丙烯酰胺会出现嗜睡、情绪和记忆改变、幻觉和震颤等症状,伴随末梢神经病如手套样感觉、出汗和肌肉无力。累积毒性,不容易排毒。

 

防护措施:在搬运和使用中必须穿戴好防护用具,如防毒服、防毒口罩及防毒手套等。

 

5.DTT二硫苏糖醇

    二硫苏糖醇是一种小分子有机还原剂,散发难闻的气味,可因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。

 

     防护措施:当使用固体或高浓度储存液时,戴手套和护目镜,在通风橱中操作。

 

6.TEMED四甲基乙二胺

     四甲基乙二胺是一种无色透明的液体,有微腥臭味,在分子生物学中,可以用于配制SDS-PAGE胶,TEMED可以催化APS产生自由基,从而加速聚丙烯酰胺凝胶的聚合,可作为一种促凝剂使用。


      防护措施:防止误吸,操作时快速,存放时密封。


 


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      研究发现,PTENα磷酸酶可以去特异性去磷酸化Moesin T558位点。多种体内体外趋化实验显示,PTENα缺失的中性粒细胞的趋化能力明显弱于正常的中性粒细胞。在沙门氏菌感染小鼠诱导的败血症模型中,当 PTENα缺失时,实验小鼠对于细菌的抵抗能力大大下降,生存时间明显减少。

    综上所述,PTENα通过调节Moesin促进中性粒细胞的趋化过程,进而在机体抗细菌感染中发挥重要作用。这一研究证明PTENα作为Moesin的磷酸酶,通过非依赖于PI3K的信号通路调控中性粒细胞趋化。而且,PTENα与PTEN虽然具有完全一致的功能结构域,但由于其亚细胞定位或作用的靶蛋白不同,可发挥相互独立又互相补充的重要生理功能。PTEN在中性粒细胞趋化性的调控中,主要决定其细胞是否能够明确趋化方向,而PTENα则主要决定趋化细胞是否能够有效形成伪足,发生明确的细胞变形并协助细胞运动,两者相辅相成,共同完成机体的抗感染功能。


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     细胞培养也叫细胞克隆技术,在生物学中的正规名词为细胞培养技术。在细胞培养技术中会用到一些试剂,下面带大家去看看一些常用的试剂。

(1)高糖DMEM溶液

用新配制的三蒸水配制,高糖DMEM干粉(规格10×1L),溶入约总量的1/3的三蒸水,并用水洗净包装袋,在磁力搅拌器上搅拌30分钟,加入NaHCO2 3.75克,补加水至zui终量。用1N HCL调整PH为7.2,0.22μm滤膜抽滤除菌,分装-20℃保存,使用时加10%的胎牛血清及双抗溶液(zui终浓度:青霉素100U/ml,链霉素 100μg/ml)

(2) 胎牛血清

使用前56℃水浴30分钟灭活,无菌条件下分装成10ml包装,-20℃保存。用时以10%浓度注入培养液中。

(3) 青霉素、链霉素双抗溶液

青霉素100万单位及硫酸链霉素1g无菌条件下溶于消毒三蒸水10ml,分装,-20℃保存。使用时每1000ml培养液加入青、链霉素混合液1ml,zui终浓度为青霉素100单位/ml,链霉素100μg/ml。

(4)磷酸盐溶液(PBS):

NaCl 8g, KCl 0.4g, NaHPO4.H2O 1.15g KH2PO4 0.2g 分别溶于1000ml三蒸水中,调节PH值至7.4高压蒸气灭菌,分装后4℃保存。

(5)胰蛋白酶溶液

用三蒸水制备成0.25%浓度,0.22μm滤膜抽滤除菌,4℃保存。

(6)0.1%明胶溶液

称取明胶粉剂0.1g于烧杯中,加入三蒸水100mL于50℃充分搅拌至其完全溶解,0.22μm滤膜抽滤除菌,4℃保存。


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     在Science杂志同期专文评述中,国际植物抗病研究权威科学家美国科学院院士Jeffery Dangl和英国皇家学会会员、美国科学院外籍院士Jonathan Jones对这一重大突破性成果给予高度评价:“首个抗病小体的发现,为植物如何控制细胞死亡和免疫提供了线索”(“The first plant resistosome structure provides clues to cell death control and immunity”),显著的推进了人们对植物免疫机制的认识(“These important findings substantially advance our understanding of plant immune mechanisms”), 打开了多个开拓性研究方向 (“open many new lines of what is sure to be ground-breaking research”)。《植物学报》同时发表国际著名植物抗病专家Xin Li(李昕)等人题为“开启防御之门:植物抗病小体”的专文评述,认为该项成果“完成了植物NLR蛋白复合物的组装、结构和功能分析,揭示了NLR作用的关键分子机制,是植物免疫研究的里程碑事件”。


    各种农作物病虫害,严重威胁农业生产。为了减少损失,农业生产中不得不大量施用化学农药,但这又对环境、人类健康、和农业可持续发展带来了挑战。在保护作物的同时,减少化学农药的施用,成为摆在农业生产者和科学家面前的一道难题。解决这一问题的关键,就存在于植物细胞中:植物细胞内数目众多的抗病蛋白。这些蛋白发现病菌后,迅速启动植物防卫反应,杀死病菌,从而保护植物免受侵害。利用抗病蛋白,设计新型抗病虫育种,将大大减少化学农药的施用。抗病蛋白高分辨度结构和作用机制的解析,将为设计抗广谱、持久的新型抗病蛋白,发展绿色农业奠定了核心理论基础。


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     从临床应用角度考核检修试剂的可靠性,是以其能否区分健康与疾病的能力作为依据的。检定内容除包装、标签、说明书等外,对试剂的机能,如特异性、敏捷度、精密度和线性等均需逐项检定,通过对一系列参比品的检测,结果符合要求者才为合格。部临检中央对乙肝ELISA诊断试剂在这方面进行了工作,通过质量评价,促进了试剂质量的进步。进行这种评价,首先需要收集有关的病人血清,然后用公认的检测该项标志物zui可靠的试剂进行测定,以确定其为阳性或阴性。目前还很难找到100%可靠的试验,任何试验都会泛起假阳性或假阴性。这一组表明测定物为阳性或阴性的血清组成"血清盘"(panel)。小鼠ELISA试剂盒实验中如何正确温育

    温育是ELISA测定中影响测定成败zui为关键的一个因素。ELISA作为一种固相免疫测定,抗原抗体的结合反应在固相上进行,要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合,必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比,即温度越高,则所需时间相对较短。zui为常用的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2~8℃。 

    温育这一步是临床ELISA测定中zui容易出现问题的步骤。通常目前国内ELISA商品试剂盒的反应温育时间为37℃ 30分钟~1小时,进口ELISA试剂盒则通常为37℃ 1~2小时才能有较完全的结合,低于1小时,可能会影响测定下限。因此,关于温育,在实际测定操作中一定要注意以下几点: 

    ELISA试剂盒要保证在设定的温度下有足够的反应时间。一般来说,加完样本和/或反应试剂后,将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时,孔内温度从室温升至37℃,需要一定的时间,尤其是在室温比较低以及非水浴的状态下,这段升温时间可能还比较长,而在临床实验室中,很少有人注意这个问题,通常是将微孔板一放入恒温箱即开始计时,这样就很容易造成实际测定中温育的时间不够,弱阳性样本测不出来的问题。 


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        嗜中性粒细胞是哺乳动物外周血中非常重要的一类白细胞,它是zui早对入侵病原微生物做出免疫反应的固有免疫细胞。在感染的早期,嗜中性粒细胞能够通过吞噬细菌或者直接释放自身的水解酶达到清除细菌的目的。同时,嗜中性粒细胞还能够对细菌做出免疫应答,产生促炎症因子如TNF、IL-6等,招募其它免疫细胞如巨噬细胞等,从而放大免疫反应对入侵细菌进行更彻底的清除。然而,胞内菌如何激活嗜中性粒细胞的机理尚未明了。

       Sox2是一种重编程过程中的重要转录因子,它可以通过招募NuRD复合物参与自噬调节,在胚胎发育和细胞重编程过程中发挥着至关重要的作用(Wang S, et al. Cell Stem Cell, 2013)。研究人员发现发现Sox2蛋白在嗜中性粒细胞的细胞质中高表达,而且在细菌感染的情况下,Sox2与入侵的细菌共定位,且呈现明显的斑点状分布。在粒细胞条件性敲除Sox2基因的小鼠抵抗细菌感染的能力显着降低,并且嗜中性粒细胞产生促炎症因子的能力明显下降,表明Sox2蛋白在抵抗细菌感染中发挥重要作用。

       进一步研究发现,嗜中性粒细胞胞浆内的Sox2蛋白通过其HMG结构域与入侵细菌的DNA结合,该识别具有DNA序列特异性。Sox2蛋白在结合细菌DNA之后发生二聚化,二聚化的Sox2蛋白能够招募TAB2蛋白,继而活化TAK1蛋白激酶,从而引起NF-κB信号通路的活化,导致嗜中性粒细胞促炎症因子的分泌。综上所述,Sox2蛋白作为胞内细菌DNA的识别子,激活嗜中性粒细胞,激发机体的天然免疫反应,抵御病原微生物的感染。对嗜中性粒细胞活化机制的揭示,为操纵白细胞治疗感染性疾病具有重要的指导意


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      研究者说道,曾经研究人员认为这些酶类会一直位于细胞外部发挥作用,如今这种名为MMP12的酶类则可以结合细胞进入到细胞核中来作用,后期我们将深入揭开该酶类的神秘面纱;MMP12是在弹性蛋白中发现的,弹性蛋白是一种存在于肺部和动脉中,用以使得器官和血管在拉伸后维持形状的弹性组织;当吸烟者肺部和动脉中存在不需要的MMP12作用时,其就会破坏弹性蛋白,引发肺部或者动脉失去弹性,zui终就会引发病灶区域发生炎症,进而导致慢性阻塞性肺病和动脉疾病的发生。

  研究中,研究人员通过对MMP12引入荧光物质,利用核磁共振技术在亚显微尺度上来研究了酶类MMP12同细胞相互作用的分子机制;研究者说道,我们都知道MMP12在抵御细菌和病毒感染及关节炎上扮演着重要角色,而关于此酶我们知道的越多,那么我们就越能清楚理解其作用机制,从而更能有效利用MMP12来治疗人类的疾病。下一步研究人员将会去揭示该酶穿过细胞的分子机制。


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免疫检验技术的出现zui早可追溯至19世纪末。1896年,Widal发现在伤寒杆菌中加入伤寒病菌人的血清可致伤寒杆菌发生特异的凝集现象,利用这种凝集现象可有效的诊断伤寒病,这就是zui早的用于病原体感染诊断的免疫凝集试验,亦即的肥达试验(Widaltest)。稍后,即1897年,Kraus又发现将细菌培养液与其相应的抗血清混合后可发生肉眼可见的沉淀反应,于是,免疫沉淀试验又应运而生。


  到1900年,维也纳大学病理解剖系的年仅32岁的助教Landsteiner发现在一些人的血浆能使另一些的红细胞凝集,这种同种凝集现象的发现,成为人类血型分类的基础,并由此而衍生了生物科学中的一个特殊分支即免疫血液学,Land—steiner也因人类血型的发现获得了1930年的诺贝尔生理学或医学奖。并且,直至今天,我们仍然在使用基本的红细胞凝集试验鉴定ABO血型。在同一年代,Bordet又发现了补体结合试验(c。mplementfixationtest,CFT),即抗原抗体反应后具有补体结合的能力,如红细胞与溶血素反应后,如有补体存在即可出现溶血现象。因此,利用这种免疫溶血机制做指示系统,可以检测另一反应系统中抗原或抗体的存在与否。1906年Wassermann将这种试验用于梅毒螺旋体感染的诊断,建立了的华氏反应。下面我们首先来看看免疫沉淀反应测定技术的发展历程。


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流式细胞仪并非是完全自动化的仪器,准确的实验结果还需要准确的人工技术配合,所以标本制备需要规范,仪器本身亦需要质量控制。


  流式细胞术免疫学检测的影响因素和质量控制


流式细胞术在免疫学中有着广泛的应用,其免疫荧光染色的标本制备非常重要,常常由于标本制备过程中出现人为非特异性荧光干扰(尤其在间接免疫荧光染色中)或细胞浓度低等影响检测结果。解决这些影响因素的方法如下:


(1) 确保标本上机检测前的浓度为1X106/ml,细胞浓度过低直接影响检测结果。


(2) 使用蛋白封闭剂,封闭非特异结合位点,尤其在间接免疫荧光标记时必不可少。常用的蛋白封闭剂为0.5%牛血清白蛋白和1%胎牛血清。


(3) 荧光抗体染色后充分洗涤,注意混匀和离心速度,减少重叠细胞和细胞碎片。


(4) 设置对照样品,采用与抗体来源同型匹配的无关对照和荧光抗体的本底对照。


(5)判定结果时,应注意减去本底荧光,为使免疫荧光的定量分析更精确,应用计算机程序软件,用拟合曲线方法从实验组的曲线峰值中减去对照组的曲线峰值,可以得到更准确的免疫荧光定量结果。


(6) 注意染色后避光,保证细胞免疫荧光的稳定。


   DNA倍体分析的质量控制仍没有统一的标准, 各文献报道的实验结果差异较大,1993年10月美国癌症研究组织制定了FCMDNA定的统一标准,我们根据这些标准并结合国内有经验的专家多年的实践,对FCM的DNA分析技术的质控和注意事项进行说明。


(1) 手术切除的新鲜标本或活检针吸标本取材时,要避免出血坏死组织。


(2) 标本采集后要及时固定或深低温保存,以免组织发生自溶,DNA降解,而造成测试结果的误差。


(3) 固定剂要采用对组织细胞穿透性强的浓度,70%的乙醇固定效果较好。


(4) 单细胞悬液制备过程中,注意将待测细胞成分分离出来,减少其他成分的干扰,并注意不要损伤该群细胞。


(5) 细胞样品的采集要保证足够的细胞浓度,即1X106/ml,杂质、碎片、团块和重叠细胞应<2%,对肿瘤细胞DNA异倍体的分析样品,至少有20%的肿瘤细胞存在。


(6) 石蜡包埋组织单细胞制备时要注意:取材时应选取无自溶、坏死的组织,对肿瘤组织标本,选取含肿瘤细胞丰富的区域;石蜡组织片的厚度要适宜,**为40~50μm 。过薄或过厚的切片均会影响检测结果;彻底脱蜡,以免残留的石蜡影响酶的消化活性,验证脱蜡是否完全的方法是弃去二甲苯,加入100%乙醇,如果无絮状物浮起,说明蜡已脱净;水化要充分,使组织还原到与新鲜组织相似的状态;注意消化的时间和消化酶的活性。常规使用0.5%胃蛋白酶,pH 1.5。



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