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小鼠抗人IgM杂交瘤细胞;细胞株培养的具体无菌技术要点

 

小鼠抗人IgM杂交瘤细胞;细胞株培养的具体无菌技术要点:
1. 实验开始前,无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌,用70%ethanol擦拭无菌操作台面,并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后,才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株,即使培养基完全相同也不可共用培养基,以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后,请将实验物品拿出工作台,用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后,才能进行下一个细胞株的操作。

  

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞,必要物品(试管架、吸管、吸取器或吸管盒等)可以暂时放置,其它实验用品使用完毕后应移出,有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成,请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品,避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处,也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后,请用手夹住瓶盖并轻握瓶身,倾斜大约45°角取用,尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。
4. 定期检测下列项目:
4.1. CO2钢瓶的CO2压力
4.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染(水盘的水需用无菌水,每周定时更换)。
4.3. 无菌操作台内的airflow压力,定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜,预滤网(300小时/预滤网,3000小时/HEPA)。

4. 水槽内可添加消毒剂(Zephrin 1:750),需定期更换水槽中的水。

6. 工作人员应当首先注意自身安全,必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作,并选择适当等级的无菌操作台进行(至少是Class II)。操作过程中,应避免引起aerosol的产生,小心有毒性药品,例如DMSO和TPA等,并避免针头的伤害等等。

RN-c, 大鼠皮质神经元
RN-s, 大鼠纹状体神经元
RSC, 大鼠雪旺细胞
RA, 大鼠星形胶质细胞
RLF, 大鼠淋巴成纤维细胞
rRTEC, 大鼠肾小管上皮细胞
rCSC, 大鼠心肌细胞
RDFs, 大鼠真皮成纤维细胞
RLFs, 大鼠肺成纤维细胞
rCF, 大鼠心脏成纤维细胞
MN-h, 小鼠海马神经元
MN-s, 小鼠纹状体神经元
mOPC, 小鼠少突胶质前体细胞
MA, 小鼠星形胶质细胞
MLF, 小鼠淋巴成纤维细胞
mRTEC, 小鼠肾小管上皮细胞
CSC, 小鼠心肌细胞
小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)
MEF, 小鼠胚胎成纤维细胞
MM, 小鼠小胶质细胞
mCF, 小鼠心脏成纤维细胞
MN-c, 小鼠皮质神经元
 细胞名称
人绒毛膜毛细血管内皮细胞
人羊膜上皮细胞