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    细胞分裂是生命的基础,母细胞必须在这一过程中将DNA精确分配给两个子细胞。而染色体上的着丝粒是细胞成功分裂的关键,这个特殊的DNA区域是纺锤丝微管的附着之处,也是姐妹染色单体相互连接的地方。着丝粒出现问题会导致子细胞染色体异常,引发唐氏综合症等疾病。


      研究人员应用一系列生物物理学技术,研究了CENP-A核小体的结构和稳定性。数据显示,这些核小体的结构非常灵活,在没有CENP-C的情况下呈现出松散构象,在存在CENP-C的时候表现为紧凑形态。而且CENP-C诱导的形态改变,与DNA如何围绕核小体有关。


     这项研究解决了CENP-A分子在着丝粒上的稳定性问题。在正常条件下,CENP-A有效结合着丝粒而且不放手。研究人员发现,与传统核小体不同,CENP-A根本不从核小体解离。CENP-A从一开始就牢牢粘在着丝粒上,但当细胞缺乏CENP-C时,CENP-A很容易游离开,说明CENP-C决定着CENP-A的稳定性。


     近二十年来,人们逐渐发现染色体遗传受到了表观遗传学控制。包括Black在内的研究者们提出,取代常规组蛋白H3的CENP-A,是着丝粒区域关键的表观遗传学蛋白。


     核小体一般被认为是静态的支架,功能性分子在其上组装。而这项研究提出了不同于传统观点的表观遗传学模式。Black指出,组蛋白变体和翻译后修饰通过改变形态来影响核小体的生物学特性,而核小体是细胞分裂和基因表达的主动参与者。


“如果着丝粒区域丧失稳定性,染色体和基因就无法正确传递给子细胞。这种灾难性事件是癌细胞的标志之一。如果这种情况发生在精细胞和卵细胞中,就会导致流产或者引发唐氏综合症等疾病。"


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      免疫途径应是多种多样的,如静脉、腹腔、肌肉、皮内、皮下和淋巴结等,但肌肉和皮内两种途径较少应用。目前一般倾向于小剂量、多点、多途径的方法,但具体应视抗原的生物学特性和理化特性来决定。酶、毒素等生物活性抗原,一般不宜采用静脉注射。球蛋白抗原免疫可选用皮下、皮内和肌肉注射。但效价不高,因此大都选用抗原加弗氏佐剂、足掌皮下注射的方法,或者注卡介苗使腘淋巴结肿胀,然后直接注入腘淋巴结内的方法,增强抗体的产生。

      足掌注射为近年来常用的免疫途径,能获得相当良好的效果,但剂量不宜过大,一般家兔0.2~0.5mL,否则肿胀严重。有的采用先经足掌内注射卡介苗(后足掌各注 0.2~0.5mL)。10~14d后,腘淋巴结肿大,然后向淋巴结内注射加有完全佐剂的抗原,两侧各0.5mL左右,半个月后再注射不加佐剂的抗原(3mg/mL)皮下或肌肉多点注射,每点0.1mL,总量0.5mL左右、这样免疫效果较为理想。

注射次数可分为一次注射和多次注射两种。一次注射,抗体产生的慢,效价低,但特异性高,如果再次注射,抗体产生的快,效价高,持续时间也较久。多次注射,可得高效价血清,但往往特异性较差.多次免疫的间隔时间,可因抗原性质不同而异。


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      细胞要么在培养瓶表面贴壁生长(锚定依赖性)要么悬浮生长(非锚定依赖性)。细胞的生长和分裂,通常遵循一个由四个阶段组成的特征性增长模式:停滞期,对数期(指数期),平稳期(平台期)和衰退期。


停滞期——将细胞接种至培养瓶之后,细胞逐步恢复的同时,缓慢生长。

对数期(指数期)——细胞进入一个对数生长的时期,一直持续到整个生长表面被占满或细胞密度超过培养基提供营养的能力。

平稳期——细胞增殖减慢或停止。

衰退期——如果不更换培养基且细胞数量不减少,细胞活力会下降,并出现细胞死亡。


      为了确保活力,遗传稳定性和表型稳定,必须使细胞保持在对数期。这意味着细胞需要在进入平稳增长阶段之前,或在单层细胞长成 100% 融合之前,或在悬浮细胞达到推荐的最大细胞密度之前定期进行传代培养。为每个细胞系绘制生长曲线,对于测定该细胞系的生长特性是必要的。


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     原代培养时,如果上皮细胞和成纤维细胞为分区成片混杂生长,每种细胞都以小片或区域性分布的方式生长在瓶壁上。可采用机械的方法去除不需要的细胞区域而保留需要的细胞区域,其方法如下:

(1)将要纯化细胞的培养瓶,在净化室内放在倒置显微镜监视下进行。

(2)用硅橡皮刮子在不需要生长的细胞区域推划,使细胞悬浮在培养液中,注意不要伤及所需细胞。

(3)推划后用培养液冲洗振摇两次倒掉,即可将培养基加入原瓶继续培养。

(4)数日后如发现不需要的细胞又长出,可再进行上述操作,这样反复多次可以纯化细胞。操作过程中要严格无菌操作,防止污染。


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实验试剂

 

采用T7? Tag Affinity Purification Kit


T7?Tag抗体琼脂。B/W缓冲液:4.29mM Na2HPO4,1.47 mM KH2PO4,2.7 mM KCl, 0.137mM NaCl,1%吐温-20,pH7.3 洗脱缓冲液: 0.1M柠檬酸,pH2.2. 中和缓冲液:2M Tris,pH10.4。 PEG 20000。


实验步骤


1.100ml 含重组表达质粒的菌体诱导后,离心5000g×5min,弃上清,收获菌体,用10ml预冷的B/W缓冲液重悬。


2. 重悬液于冰上超声处理,直至样品不再粘稠,4℃离心 14000g×30min,取上清液,0.45μm膜抽滤后作为样品液。


3. 将结合T7?Tag抗体的琼脂充分悬起,平衡至室温,装入层析柱中。


4. B/W缓冲液平衡后样品液过柱。


5. 10ml B/W缓冲液过柱,洗去未结合蛋白。


6. 用5ml洗脱缓冲液过柱,每次1ml,洗脱液用含150μl中和缓冲液的离心管收集,混匀后置于冰上,直接SDS-PAGE分析。


7. 将洗脱下来的蛋白放入透析袋中,双蒸水透析24hr,中间换液数次。


8. 用PEG 20000浓缩蛋白。


注意事项

 

蛋白在过层析柱前,要0.45μm膜抽滤,否则几次纯化后,柱子中会有不溶物。


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      研究者将这种细胞分裂方式称之为klerokinesis,klero是一个希腊语的前缀,意思是“指定的继承(allotted inheritance )。”并表示促进这种分裂方式或能够防止某些癌症的发展。


      目前的研究的*初目标是使人类细胞中有额外的染色体组。结果却意外地观察到细胞分裂的新形式。本次研究的领导者,华盛顿大学医学和公共健康血液肿瘤科医学系助理教授 Mark Burkard说:“在实验室中,我们的目标是要为乳腺癌的太多染色体组找到新的治疗策略”


     正常的细胞分裂是有机体从一个单一的受精卵生长发育为一个全面发展的个体的核心。这过程中细胞分裂的次数可能超过一百万。在每个细胞分裂中,一个母细胞变成两个子细胞。


   即使一个完全成熟的成年人,许多种类的细胞经常通过细胞分裂重制。


      细胞的自我复制基本过程从合成阶段开始,细胞核中染色体数目加倍。在有丝分裂期间,色体向两端分离,*后,在细胞分裂过程中,一个细胞被切断成两个子细胞。


      研究小组首先使用了拥有太多的染色体的细胞以此模拟癌细胞,接着用化学阻断细胞分裂,并等着看发生了什么事。“我们希望得到两套染色体数恢复的细胞,”研究人员解释。


   接着,他们惊奇发现,子细胞不是出现异常,而是并没有进行正常细胞的分化进程。这与*初的假设:不正常的细胞分裂不会长期负面影响人类细胞相反。


   Burkard说:“开始时一个单元格中有两个细胞核,接着令人惊奇的是,细胞弹出分开成两个细胞,而无需通过有丝分裂。”


   两个新的细胞都继承了拥有一套完整的染色体细胞核。不可思议的是,这发生在分裂的延迟生长阶段,而非分裂末期。


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     来自纽约大学的科学家们发现了一个白血病细胞生存的秘密:一个遗传突变推动了白血病细胞。这项研究不仅解答了一个进化谜题,并为开发出高度靶向的白血病治疗铺平了道路。纽约大学Langone医学中心的研究人员描述了,突变蛋白Fbxw7在癌细胞和健康细胞中表达时的行为差异。

     “Fbxw7是血细胞生成的必要条件。而为何一个对于生存如此重要的基因上会持续存在一种突变?这是一个大的谜题。我们发现,这一突变会影响癌细胞,但却对健康细胞没有影响,”论文的主要作者、纽约大学Langone医学中心病理学教授、霍华德休斯医学研究所青年科学家Iannis Aifantis博士说。Fbxw7蛋白调控了造血干细胞的生成,后者是可以分化为所有类型血细胞的前体细胞。没有Fbxw7,机体会丧失造血能力,zui终患上贫血。科学家们还只是刚开始了解突变Fbxw7出现在相当一部分人类肿瘤,包括胃癌、前列腺癌和一些乳腺癌中的原因。这一突变尤其普遍存在于T细胞急性淋巴母细胞白血病(T-ALL)中。T-ALL是一种少见的致命性小儿白血病,其特征为未成熟白细胞大量表达。

      Aifantis博士与研究生Bryan King以及其他研究人员展开协作,在他们的实验中首先将突变的Fbxw7导入到了小鼠健康的血液干细胞中。“我们本以为突变会诱导贫血,就如Fbxw7缺失时一样,”Aifantis说。然而让研究人员感到惊讶地是,什么事情也没有发生——干细胞继续生成血细胞。而当研究人员随后将突变Fbxw7导入到小鼠的白血病血液干细胞(那些生成过量白细胞引起白血病的细胞)中时,癌症速度加快。“我们发现,突变使得白血病干细胞变得更具侵袭性,”Aifantis说。

     在接下来的实验中,研究人员证实Fbxw7结合并降解了推动白血病干细胞的Myc蛋白。长期以来Myc被认为与许多其他的癌症以及治疗后的癌症复发相关。他们发现,当Fbxw7突变时,Myc不再受到抑制,癌症干细胞群增长。这一认识还有助于解释健康血液干细胞似乎“忽视”突变Fbxw7的原因。不同于白血病干细胞,健康血液干细胞通常处于静止状态,直至机体需要紧急供血时才会被激活,且它们很少表达Myc。Aifantis 说:“由于未进入细胞周期,正常血液干细胞表达极少的Myc。突变不会影响不存在的物质。而白血病干细胞表达Myc,Fbxw7突变提高了它的丰度。”随后研究人员提出,消除Myc是否有可能阻止白血病。事实上,在白血病小鼠中敲除Myc基因可以耗尽白血病干细胞,终止肿瘤生长。他们利用阻断Myc的一类新癌症药物——BET抑制剂,处理小鼠和人类细胞以及T-ALL的骨髓样本时获得了相同的结果。“我们发现BET抑制剂确实能够杀死白血病干细胞。没有干细胞,白血病根本无法生长,”Aifantis博士说。


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      养细胞就像养孩子,你要仔细认真的爱护它,呵护它。可是无论你怎么努力,还是难免会出现变数。到底细胞怎么了?于是乎你开始各个环节检查寻源,毫无头绪。其实,很可能是你选错了血清。

血清是细胞培养的天然培养基,血清选错了,细胞自然状态会受影响。


     据1997年出版的Medical and healthcare marketplace guide估测,欧美市场每年用于生物药物和疫苗生产的胎牛血清为50万升,价值10亿美元,而使用胎牛血清后所产出的产值为40亿美元,目前的生物技术产品和病毒性疫苗的生产大多数仍依靠细胞培养来表达产物和扩增病毒。牛血清的需求量以每年25%的速度增长。血清需求量不断增加的同时,对于血清质量的要求也逐渐提高。


     由于天然环境差和抗生素的大量使用,国产血清质量普遍不高。国内环境污染严重,同时饲养过程中抗生素极其滥用,有毒有害物质会大量残留在血清中,zui终不利于细胞的生长。


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     抗体(英语:antibody),(免疫球蛋白不仅仅只是抗体)是一种由浆细胞(效应B细胞)分泌,被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的大型Y形蛋白质,仅被发现存在于脊椎动物的血液等体液中,及其B细胞的细胞膜表面。抗体能识别特定外来物的一个独特特征,该外来目标被称为抗原。

抗体规律:

(1)初次反应产生抗体:当抗原次进入机体时,需经一定的潜伏期才能产生抗体,且抗体产生的量也不多,在体内维持的时间也较短。


(2)再次反应产生抗体:当相同抗原第二次进入机体后,开始时,由于原有抗体中的一部分与再次进入的抗原结合,可使原有抗体量略为降低。随后,抗体效价迅速大量增加,可比初次反应产生的多几倍到几十倍,在体内留存的时间亦较长。


(3)回忆反应产生抗体:由抗原刺激机体产生的抗体,经过一定时间后可逐渐消失。此时若再次接触抗原,可使已消失的抗体快速上升。如再次刺激机体的抗原与初次相同,则称为特异性回忆反应;若与初次反应不同,则称为非特异性回忆反应。非特异性回忆反应引起的抗体的上升是暂时性的,短时间内即很快下降。


功能:

抗体的主要功能是与抗原(包括外来的和自身的)相结合,从而有效地清除侵入机体内的微生物、寄生虫等异物,抗体(antibody)是一种应答抗原产生的、可与抗原特异性结合的蛋白质。每种抗体与特定的抗原决定基结合。这种结合可以使抗原失活,也可能无效但有时也会对机体造成病理性损害,如抗核抗体、抗双链DNA抗体、抗甲状腺球蛋白抗体等一些自身抗体的产生,对人体可造成危害。

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    使用哪种来源的细胞能更好地修复心脏,人们一直有争论。迈阿密大学的研究人员近日发现,使用两种不同类型的干细胞来治疗心脏病,可更好地改善心脏功能。


   因冠状动脉疾病或病毒性心肌病而引发急性心脏损伤的患者可通过目前的疗法来稳定。不过,现代医学在修复心脏损伤方面能力有限,这会对整体健康和生活质量产生长期的影响。因此,通过干细胞治疗来促进心脏受损部分再生,对治疗这些患者是很有价值的。然而,这些疗法仍处于临床研究的试验阶段。


    这项研究表明,与单独使用任一细胞相比,在单一疗法中组合两种类型的干细胞有着有利的协同效应。这两种细胞包括骨髓来源的间充质干细胞(MSC)和cKit+的心脏干细胞(CSC)。


     研究表明,联合细胞疗法明显改善了心脏功能。治疗后,活组织明显增加,收缩功能改善,且新的心肌细胞形成,这有助于心脏修复。


     在这项研究中,研究人员展示了遗传谱系追踪和活组织成像的数据,表明CSC可以在小鼠心脏组织中形成新的心肌细胞。将这些小鼠的心肌外植体与MSC共培养,作者发现MSC分泌的两种因子,干细胞因子(SCF)和基质细胞衍生因子-1(SDF1),可促进CSC增殖,迁移出外植体,并分化成跳动的心肌细胞。


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    绝大部分的同型对照产品都是单克隆抗体,因此不适用于作为多克隆抗体的对照(因为多抗含有多种IgG的亚型)。


    阳性对照的使用是一个实验中确定抗体及检测系统是否正常工作的依据,也是确定待测标本中是否存在待测蛋白的一个依据!尤其是检测的标本是不确定是否有待测蛋白表达时。因此当实验没有阳性结果出现时,zui好的选择是实验合适的阳性对照。


说明书上都有推荐的阳性对照。但是如果说明书上没有推荐时,请参考以下条款:


     看看说明书中是否有Abreviews。任何被其他客户成功检测的组织、细胞或者裂解物均可以作为合适的阳性对照!


    根据说明书上的Swiss-Prot或Omnigene数据库来查找。这些数据库经常会列出该蛋白表达的组织,这也可以作为合适的阳性对照!


查查该蛋白的GeneCards吧,这里通常会有蛋白在不同组织的表达水平。 


    对于不同的问题,不同的测试,相关性的不同的性能,拿流式抗体来说,在使用的过程中要特别谨说明书使用!


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     干细胞可以作为万能工人在我们机体中发挥作用,修复损伤组织并且更新新生组织,科学家们通过研究揭示了成年人机体中干细胞如何发挥作用,但他们却并不清楚这些干细胞zui早从哪里来;刊登于Cell上的一项研究报告中,来自洛克斐勒大学的研究者通过研究就鉴别出了一种新型机制,该机制可以指导细胞在发育期间转变成为干细胞,该研究或帮助解释细胞间如何通过交流来介导上述过程,对于开发新型皮肤癌疗法或带来一定帮助。


     研究人员Elaine Fuchs表示,当我们越来越多地揭示成体干细胞的特征时,实际上我们并不清楚它们来自哪里,如今我们在皮肤中发现,一旦单层表皮胚胎中的细胞开始分裂形成胚胎毛芽(embryonic hair bud),毛囊中的前体干细胞就会被确定。干细胞簇可以接收来自其它附近细胞的信号从而指导其停留在干细胞状态或分化成为特殊类型的细胞,而这些具有指导意义的细胞团体就被称之为“干细胞生境”,其可以维持成体干细胞群体的数量,然而研究者并不清楚这些生境细胞的产生机制。

     成体干细胞依赖于生境来被指导zui终转变成为干细胞,同时也帮助控制干细胞群体的尺寸,但目前的问题是,是否生境可以召集其它细胞来转变成为干细胞,或者说还存在其它途径?通过对小鼠的毛囊进行研究(毛囊中包含有活性干细胞),研究人员调查了毛囊形成期间细胞分裂的情况,毛囊首先以一种小芽的基层开始发育,进而随后产生多层组织,通过对基层细胞进行标记并且追踪其发育后代,研究者就发现,每进行一次细胞分裂,其中一个子代细胞就会留在原地不动,而其它细胞就会迁移到其它层面去;后期研究者发现这些“迁移者”就会变成干细胞。


     而这些细胞如何转变成为其应当变成的细胞类型,比如干细胞或皮肤细胞,研究者表示,这依赖于一系列因子,包括来自其它细胞的分子信号,这些信号可以帮助细胞开启或关闭特殊基因,研究者还发现,两个不同子代细胞间的信号活性是不相同的,而且迁移的子代细胞zui后迁移的环境中包含有较低水平的WNT信号,该信号对于胚胎发育非常关键,相比较而言,WNT信号在子代细胞停留的环境中水平较高,而WNT的水平也会影响到细胞对其它信号的反应,比如SHH信号(音猬因子)等。


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详细介绍一下细胞冻存保存的具体方法:


一、细胞冷冻保存


1.材料:


生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO(Sigma D-2650)、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene 5000-0020)、0.4%(w/v)trypan blue(GibcoBRL15250-061)、血球计数盘与盖玻片、等速降温机(KRYO10SeriesII)。


2、冷冻保存方法:


(1)传统方法: 冷存管置于4℃10分钟--->-20℃30分钟--->-80℃16~18小时(或隔夜)--->液氮槽vaporphase长期储存。


-20℃不可超过1小时,以防止胞内冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。


(2)程序降温:利用已设定程序的等速降温机以-1~-3℃/分钟之速度由室温降至(-80℃以下)-120℃,再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。


3、步骤:


(1)冷冻前24-48小时更换半量或全量培养基,使细胞处于指数生长期。


(2)配制冷冻保存溶液(使用前配制):另取一离心管,加入培养基、血清,逐滴加入二甲基亚砜(DMSO)至20%浓度,即制成双倍的冻存液,置于室温下待用。


(3)离心收集培养之细胞,用加血清的培养基重悬起细胞,取少量细胞悬浮液(约0.1ml)计数细胞浓度及冻前存活率。


(4)取与细胞悬液等量的冻存液,缓慢逐滴加入细胞悬液,并晃动试管,制成细胞冻存悬液(DMSO最后浓度为5~10%),使细胞浓度为1~5×106cells/ml,混合均匀,分装于已标示完全之冷冻保存管中,1~2ml/vial,并取少量细胞悬浮液作污染检测。严密封口后,注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。


4、注意事项:


(1)欲冷冻保存之细胞应在生长良好(logphase)且存活率高之状态,约为80~90%致密度。冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质,例如hybridoma应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。


(2)细胞在液氮中可长期冻存无限时间,而不会影响细胞活力;在-70度可保存数月。


(3)注意冷冻保护剂之品质。DMSO应为试剂级等级,无菌且无色(以0.22micron FGLP Telflon过滤或是直接购买无菌产品,如Sigma D-2650),以5~10ml小体积分装,4℃避光保存,勿作多次解冻。Glycerol亦应为试剂级等级,以高压蒸汽灭菌后避光保存。在开启后一年内使用,因长期储存后对细胞会有毒性。本方法中先制备双倍冻存液,可避免DMSO直接加入时释放的热量对细胞的损伤。缓慢逐滴加入细胞悬液是使细胞逐步适应高渗,可降低细胞受损。DMSO可能引起部分白血病细胞株的分化,可换用10%甘油冻存。


(4)冷冻保存之细胞浓度:


①normal human fibroblast:1~3×106cells/ml


②hybridoma:1~3×106cells/ml,细胞浓度不要太高,某些hybridoma会因冷冻浓度太高而在解冻24小时后死去。


③adherent tumor lines:5~7×106,依细胞种类而异。Adenocarcinoma解冻后须较高之浓度,而HeLa只需1~3×106cells/ml


④other suspensions:5~10×106cells/ml,human lymphocyte须至少5×106cells/ml。


(5)冷冻保护剂浓度为5或10%DMSO,若是不确定细胞之冷冻条件,在做冷冻保存之同时,亦应作一个backup culture,以防止冷冻失败。


(6)冻存可用10%~90%的血清,一般高浓度血清有助于维护细胞活力,此处介绍20%终浓度有利于细胞悬浮而少沉积(4度时),复苏存活率在80%~90%以上,对原代培养细胞,以90%血清冻存更为有效。


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     成体干细胞是机体内的器官维持和组织再生的基础。研究团队,在指甲底部的软组织中发现了一种新型干细胞。这些细胞被称为双功能干细胞,它们除了自我更新,还拥有形成指甲或上皮组织的双重能力。


     研究人员将荧光蛋白和其他可视化“标签”贴在小鼠的指甲细胞上,建立了一个标记滞留细胞鉴定系统(LRC)。他们发现,系统中大多数细胞反复分裂,它们的后代逐渐增多,冲淡了原有的荧光和标记。不过,在近端甲皱襞(nail proximal fold)的基底层,有一些细胞始终保持着强荧光和标记。这些围绕在指甲根部的细胞基本不分裂或者分裂的很慢,表现出了干细胞的独特性质。


      研究显示,这些新发现的干细胞很灵活,能够起到双重作用。在正常情况下,它们负责指甲和附近皮肤的生长,而且更倾向于后者。然而一旦指甲受伤或者缺失,这些干细胞就会转变职能,专门对指甲进行修复。研究人员还通过转录谱分析发现,促使双功能干细胞修复指甲的信号来自于骨形态发生蛋白(BMP)。


   下一步,研究人员希望通过合适的信号,诱导双功能干细胞再生出其他类型的组织。这样的研究将帮助人们修复指甲和指头的缺陷、治疗严重的皮肤损伤甚至进行断指再生。


    这些干细胞能在特定生理条件下再生指甲和皮肤,这是一个令人惊讶的发现。它们的双重性质非常独特,有别于其他皮肤干细胞,比如毛囊或汗腺的干细胞,


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     科学家zui近将绿色荧光蛋白和沙门氏菌体内感受热量的一种蛋白融合在一起,制造出一种能检测细胞内部不同细胞器温度波动的基因编码“温度计",这有助于人们进一步理解细胞行为。这种以蛋白质为基础的新型热传感器能通过基因编码,直接瞄准不同的细胞器,比如线粒体,同时测量膜蛋白和产生的能量,并在温度变化与细胞器的内部功能之间建立。在本实验中,研究人员能探测到褐脂肪线粒体的生热作用,并把温度与线粒体膜蛋白、三磷酸腺苷(ATP)生产在一起。


      制作这种新型“温度计"的关键,是一种已知的名为TlpA的蛋白,这种蛋白由沙门氏菌制造,其正常作用是作为一种自动调节抑制器,感知温度以控制转录,能在37℃左右进行迅速可逆的结构转录。ELISA试剂盒研究人员把绿色荧光蛋白(GFP)的荧光片段与TlpA融合,使GFP的荧光光谱随温度变化,zui后再把融合蛋白加入到能瞄准线粒体、内质网或细胞质膜蛋白的序列中。


     研究人员指出,这一技术充分发挥作用的zui佳地方是脑细胞。它能更好地处理温度变化,不仅在轴突的内外,而且能在神经胶质细胞内部。胶质细胞包裹着髓磷脂,所以携带了脉冲能量的很大一部分,有助于人们更好地理解神经信号的传输。但这还有争议,脉冲神经元热动力学主要还是由实验驱动,而并非不太精确的外在温度传感器。


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     肠干细胞是机体zui快速分裂的细胞,总是在忙于生成新细胞来取代不断脱落的细胞。然而研究表明,不同于身体其他部位的干细胞,肠道中的干细胞被隐藏了起来,并且这有着充分的理由。


      华盛顿大学医学院的一项新研究表明,干细胞定位在肠道的一些“口袋”中,避免了与肠道有益微生物生成的一种重要代谢产物接触。这种代谢产物:丁酸限制了干细胞增殖,有可能阻碍了炎性肠病(IBD)如克罗恩病和结肠炎造成损伤后肠道修复自身。研究人员证实,肠壁内一些称作为Leiberkuhn隐窝的微小口袋通常保护了干细胞免受丁酸伤害。但当肠道受损时,丁酸可以接近这些干细胞,抑制了它们的增殖。


     科学家们知道这些隐窝已有250多年,但从未真正了解它们存在的原因。基于我们的研究结果,我们猜想隐窝已进化为保护干细胞,以使肠道能够有一条途径不断地更新它的内壁。

      生活在肠道中的微生物会加工我们饮食中的营养物质,合成维生素。作为执行这些工作的一个组成部分,微生物会生成影响人类健康和疾病,包括炎性肠病、肥胖、哮喘和心脏病的一些代谢产物。在小鼠体内,干细胞聚集在隐窝的底部,而在实验室中干细胞直接暴露于丁酸下。我们开始想知道隐窝结构是否保护了干细胞免受丁酸损害。


     研究人员检测了肠道内表面(生成丁酸的细菌定居之所)和隐窝底部(干细胞定居之所)的丁酸水平,发现隐窝中的丁酸水平要低得多。此外,肠道表面的成熟细胞不会受到丁酸损伤,当做食物消耗了它,进一步防止了干细胞遭遇这种代谢产物。大多数脊椎动物的肠道都包含隐窝,但有一些则不包含。例如,年轻斑马鱼没有隐窝,然而它们的肠干细胞行为就像高等生物中的肠干细胞一样,快速地分裂取代受损细胞。


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