冷冻保存细胞之方法：

人细胞 冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。

冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

细胞冻存步骤：

资源名称 人细胞

种属 MCF7

类型 贴壁生长

形态 CM1-1培养液中，贴壁，上皮细胞样，多角形，紧密排列

分离基物 该细胞是从一名69岁的白人患者的中分离建立的。

提供形式 冻存管/T25培养瓶

安全等级 2

模式菌株 未知

培养方法

传代方法 将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，则吸除大部分胰酶，留约0.5mL，移至培养箱消化，约3min取出。传代用12mL CM1-1培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可分3~6皿培养；

生长条件 37℃，5%CO2，CM1-1培养液。CM1-1培养液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培养液，含谷氨酰胺，含丙酮酸钠。

生长特性 细胞刚复苏时细胞状态不好，传代一次后细胞状态就可以恢复。

存储条件 冻存则用6mL冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为6支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存，过夜移至液氮中保存。

细胞分类：

第一种：

是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。

第二种：

是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。

质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。

细胞培养过程：

细胞培养步骤：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

以下是人细胞 的相关热销产品：

Bacillus licheniformis地衣形芽孢杆菌LAMP试剂盒

Bacillus spp.芽孢杆菌通用LAMP试剂盒

Bacillus subtilis枯草芽孢杆菌LAMP试剂盒

Bacteroides fragilis脆弱拟杆菌LAMP试剂盒

Bacteroides spp.拟杆菌属通用LAMP试剂盒

Baculoviral Midgut Gland Necrosis Type Virus (BMNV)中肠腺坏死杆状病毒LAMP试剂盒

Baculovirus Penaei(BP)对虾杆状病毒LAMP试剂盒

Balamuthia mandrillaris巴氏LAMP试剂盒

Barmah Forest Virus(BFV) 巴马森林病毒RT-LAMP试剂盒

Bartonella bacilliformis杆状巴尔通体LAMP试剂盒

Bartonella elizabethae伊丽莎白巴尔通体LAMP试剂盒

Bartonella henselae汉氏巴尔通体（汉塞巴尔通体、猫抓病、猫抓热）LAMP试剂盒

Bartonella quintana五日热巴尔通体LAMP试剂盒

Bartonella spp.巴尔通体通用LAMP试剂盒

Bartonella vinsonii文氏巴尔通体LAMP试剂盒

Batrachochytrium dendrobatidis箭毒蛙壶菌LAMP试剂盒

Beak and Feather Disease Virus（BFDV）鹦鹉喙羽病病毒LAMP试剂盒

Bear Canyon virus(BCNV)熊峡谷病毒RT-LAMP试剂盒

Beauveria bassiana球孢白僵菌LAMP试剂盒

Bebaru Virus(BEBV)贝巴鲁病毒RT-LAMP试剂盒

Besnoitia besnoiti贝氏贝诺孢子虫LAMP试剂盒

Bibersteinia trehalosi海藻百伯史坦菌LAMP试剂盒

Bifidobacterium bifidum两岐双岐杆菌LAMP试剂盒

Bifidobacterium longum长双歧杆菌LAMP试剂盒

Bifidobacterium spp.双歧杆菌属通用LAMP试剂盒

BK病毒(BK Virus、BKV)LAMP试剂盒

Blastocystis spp.芽囊原虫通用LAMP试剂盒

Blastomyces dermatitidis芽生菌LAMP试剂盒

KLK13 / Kallikrein 13 抗體, 兔單抗 ELISA    50 μg

EphB6 / EphB6 抗體, 兔多抗 ELISA    400 μg

KLK13 / Kallikrein-13 抗體, 兔多抗 ELISA    400 μg

EphB6 / EphB6 抗體, 鼠單抗 ELISA    50 μg

BCL2 / Bcl-2 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA    50 μL

BCL2 / Bcl-2 抗體, 鼠單抗 WB   IP    50 μg

KLK13 / Kallikrein 13 抗體, 鼠單抗 ELISA    50 μg

OX-40L / TNFSF4 / CD252 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P    50 μg

JAM-A / F11R 抗體 (FITC), 鼠單抗 FCM    25 Test

JAM-A / F11R 抗體, 兔多抗 ELISA    400 μg

JAM-A / F11R 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA   WB   IP  50 μg

JAM-A / F11R 抗體 (APC), 鼠單抗 FCM    25 Test

JAM-A / F11R 抗體 (PE), 鼠單抗 FCM    25 Test

JAM-A / F11R 抗體, 鼠單抗 ELISA    50 μg

JAM-A / F11R 抗體, 鼠單抗 FCM   IF   ICC/IF  50 μg

Calnexin / CANX 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB    50 μg

#NAME? ELISA    50 μL

E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 抗體 (PE), 鼠單抗 FCM   IF   ICC/IF  25 Test

E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 抗體, 鼠單抗 FCM    50 μg

E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 抗體, 鼠單抗 50 μL

E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 抗體 (APC), 鼠單抗 FCM    25 Test

Dkk3 / REIC 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA    50 μg

人细胞 Dkk3 / REIC 抗體, 兔多抗 ELISA    400 μg

E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 抗體, 兔單抗 ELISA    50 μg

E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 抗體, 兔單抗 IHC-P    50 μg

Nos3 / eNOS 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB    50 μg

Dkk3 / REIC 抗體, 鼠單抗 ELISA    50 μg

收到人细胞 *处理？

1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。

2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。

3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。

4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。

5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。

6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。