细胞培养过程：

冷冻保存细胞之方法：
人外周血单核细胞培养冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

资源名称　人外周血单核细胞培养
种属:PBMC

类型:悬浮生长

分离基物:人，外周血单核细胞

模式菌株:未知

培养方法

培养基:1640，90%；FBS，10%；双抗

生长条件:Temperature: 37.0°C Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

存储条件:Freeze medium: FBS/NBS, 92%; DMSO, 8% Storage temperature: liquid nitrogen vapor phase

细胞分类：
第一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞冻存步骤：

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

收到人外周血单核细胞培养处理方法
1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。
以下是人外周血单核细胞培养的相关热销产品：
CM-R002大鼠肺平滑肌细胞完全培养基100mL丙磺舒（标准品）Probenecid质量规格：>98%,标准品

NCI-N87细胞，人胃腺癌细胞 人跟细胞,Hp2/o细胞 草鱼肾细胞;GIK诺氟沙星Norfloxacin质量规格：>99,USP,BR,可用于细胞培养

DH82(犬巨噬细胞) 5×106cells/瓶×2诺氟沙星（标准品）Norfloxacin质量规格：HPLC>98%,标准品

CA9 Others Human 人 CAIX / CA9 人细胞裂解液 (阳性对照) 诺氟沙星盐酸盐Norfloxacin HCl质量规格：含量大于98.5%

人滑膜细胞总RNAHS NA诺氟沙星盐酸盐（标准品）Norfloxacin HCl质量规格：HPLC>98%,标准品
小鼠膀胱成纤维细胞完全培养基 100mL蔗糖质量规格：分子生物学级Sucrose

AtT-20小鼠细胞 AtT-20 mouse pituitary tumor cell RPMI-1640(GIBCO)+10%FBSD-海藻糖二水质量规格：≥98%,BRD-(+)-Trehalose, dihydrate

IL12B Protein Mouse 重组小鼠 IL12B / IL-12B 蛋白 (Fc 标签)亮绿SF(淡黄)质量规格：BSLight Green SF Yellowish

U-118 MG(人脑星形胶质母细胞瘤) 5×106cells/瓶×2 SK-OV-3 [SKOV-3](人细胞)健那绿B质量规格：BSJanus Green B

CM-M012小鼠肺动脉成纤维细胞完全培养基100mL酸性绿3质量规格：BS，进口原装Guinea Green B
A9细胞，皮下结缔组织细胞 人肝星形细胞正常,LX-2细胞 CL-0088H4-IIE(大鼠细胞 )5×106cells/瓶×25-尿苷质量规格：>99%,BR5-Iodo-Uridine

叙利亚仓鼠肾细胞;BHK-215--2'-脱氧尿苷(苷)质量规格：>98%,BR5-Iodo-deoxyuridine

FCN1 Others Human 人 Ficolin-1 / Ficolin-A / FCN1 人细胞裂解液 (阳性对照) 5--2'-脱氧胞苷质量规格：>98%,BR5-Iodo-deoxycytidine

神经元细胞Many types of cells包装：5 ×105方(1ml)2'-甲氧基尿苷质量规格：>98%,BR2’-OMe Uridine

NA Others H3N2 甲型 H3N2 (A/Aichi/2/1968) 神经氨酸酶 (Neuraminidase / NA) 人细胞裂解液 (阳性对照) TES. Na;2-[(三(羟甲基)甲基)氨基]-1-乙磺酸钠质量规格：>99%,ARTES
人外周血单核细胞培养中国仓鼠卵巢细胞(亚系*);CHO-beta2(414) CL.32 pTGF-beta2(414)乙二醇双[4-(乙氧羰基)苯基](>98.0%(GC))Ethylene Glycol Bis[4-(ethoxycarbonyl)phenyl] Ether质量规格：>98.0%(GC)

FRhK-4细胞，恒河猴胚肾细胞 人胚胎*组织来源细胞,CCC-HPE-2细胞 CM-M064小鼠上皮细胞完全培养基100mL乙二醇双(4-羧苯基)(>95.0%(T))Ethylene Glycol Bis(4-carboxyphenyl) Ether质量规格：>95.0%(T)

大鼠癌细胞;MADB1069,9-双[4-(2-羟乙氧基)苯基]芴(>98.0%(GC))9,9-Bis[4-(2-hydroxyethoxy)phenyl]fluorene质量规格：>98.0%(GC)

IL1RAP Others Human 人 IL1R3 人细胞裂解液 (阳性对照) pre-ELM-11(>98.0%(T))pre-ELM-11质量规格：>98.0%(T)

脂肪细胞生长添加物PAGS苯均四酸(>98.0%(T))Pyromellitic Acid质量规格：>98.0%(T)