小鼠胚胎成纤维细胞说明书冷冻保存细胞之方法：

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
细胞冻存步骤：

资源名称　小鼠胚胎成纤维细胞说明书
种属:MEF (CF-1) IRR

安全等级:1

模式菌株:未知

培养方法

培养基:The base medium for this cell line is ATCC-formulated Dulbecco's Modified Eagle's Medium, Catalog No. 30-2002. To make the complete growth medium, add the following components to the base medium: •fetal bovine serum to a final concentration of 15%
细胞分类：
第一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞培养过程：

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。
以下是小鼠胚胎成纤维细胞说明书的相关热销产品：
人角膜成纤维细胞 (HcorF)( 5×105 ) EPC, 大鼠内皮祖细胞 Rattus银杏内酯B(标准品)Ginkgolide B质量规格：HPLC≥98%，标准品

人低分化;SK-LU-1VLup-20(29)-en-28-oic acid, 3-[β-D-glucopyranosyl(1→4)[a-L-rhamnopyranosyl) (1→2)-a -L-arabinopyranosyl]oxy], (3β,4a)-)质量规格：HPLC≥98%，标准品

CANX Others Human 人 CANX / Calnexin 人细胞裂解液 (阳性对照) VHederagenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→2)-(β-D-glucopyranosyl(1→4))-α-L-arabinopyranoside质量规格：HPLC≥98%，标准品

人粘膜上皮细胞完全培养基 100mLGDC0994GDC-0994质量规格：ERK1/2 抑制剂

RAW 264.7细胞，小鼠单核巨噬细胞细胞 溶组织梭菌Closidium histolyticum 水牛皮肤成纤维样细胞;WB-S3氨三乙酸Nitrilotriacetic acid质量规格：AR
人内皮细胞完全培养基 100mL复壁碳纳米管 40-60nm(直径),5-15μm(长度)质量规格：>97%(TPO Method)Carbon Nanotube Multi-walled 40-60nm(diam.), 5-15μm(length)

D341Med细胞，人髓母细胞瘤细胞 藤黄微球菌/腾黄八叠球菌 猫肾细胞;CRFK复壁碳纳米管 40-60nm(直径),1-2μm(长度)质量规格：>95%(TPO Method)Carbon Nanotube Multi-walled 40-60nm(diam.), 1-2μm(length)

CCL3 Protein Mouse 重组小鼠 CCL3 / Mip1a 蛋白复壁碳纳米管 60-100nm(直径),5-15μm(长度)质量规格：>95%(TPO Method)Carbon Nanotube Multi-walled 60-100nm(diam.), 5-15μm(length)

NIH/3T3(小鼠胚胎细胞) 5×106cells/瓶×2 人 EVI2A 人细胞裂解液 (阳性对照) 3,5-二苄氧基苄溴(>98.0%(GC)(T))质量规格：>98.0%(GC)(T)3,5-Dibenzyloxybenzyl Bromide

小鼠色素瘤瘤株;B16复壁碳纳米管 10-20nm(直径),5-15μm(长度)质量规格：>97%(TPO Method)Carbon Nanotube Multi-walled 10-20nm(diam.), 5-15μm(length)
MN-s, 小鼠纹状体神经元Cupricsubcaonate盐基性碳酸铜5克CP，99%

表达小鼠MHCⅠ类分子Kb的人胚肾细胞;293KB 人输尿管上皮细胞完全培养基 100mL2-炔基 2-qTHYNYLPYRIDINq 1942-84-

人肠平滑肌细胞RNAHISMC miRNA5 μgChromicacidfoginhibitor雾抑制剂500毫克AR

三.小鼠正常细胞L-TYROSINEL-酪酸美国药典级25G60-18-4RT

小鼠髋动脉内皮细胞;PIEC3687-31-8LEAD(II) ARSENATE
小鼠胚胎成纤维细胞说明书ANGPT2 Others Human 人 ANG2 / Angiopoietin-2 人细胞裂解液 (阳性对照) 溴邻苯三酚红Bromopyrogallol red质量规格：IND

星形胶质细胞培养基ACM盐酸副品红Basic Fuchsin质量规格：BS,用于生物学染色

CD164 Others Human 人 CD164 / Endolyn 人细胞裂解液 (阳性对照) 灿烂黄Brilliant Yellow质量规格：IND

GPS5 豚鼠皮肤成纤维样细胞刚果红(AR)Congo red质量规格：AR

CM-R123大鼠角膜成纤维细胞完全培养基100mL钙羧酸指示剂(AR)Calconcarboxylic acid质量规格：AR
收到小鼠胚胎成纤维细胞说明书处理方法
1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。