人视网膜神经细胞说明书冷冻保存细胞之方法：

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
细胞冻存步骤：

资源名称　人视网膜神经细胞说明书
种属:WERI-Rb-1

类型:器官: 眼睛 组织: 视网膜 疾病: 视网膜母细胞瘤

形态:圆形细胞聚集成葡萄状

模式菌株:未知

培养方法

培养基:RPMI-1640(GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, glucose 2.5g/L, Sodium Pyruvate 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度。

生长特性:悬浮生长
细胞分类：
第一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞培养过程：

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。
以下是人视网膜神经细胞说明书的相关热销产品：
表达小鼠MHCⅠ类分子Kb的人胚肾细胞;293KB 人输尿管上皮细胞完全培养基 100mL壬烷(>99.5%(GC),标准物)Nonane质量规格：>99.5%(GC),标准物质

人肠平滑肌细胞RNAHISMC miRNA5 μgN-乙酰基-5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-2'-脱氧胞苷DMT-Ac-dC质量规格：>98%,BR

三.小鼠正常细胞保护胸甙(DMT-T)DMT-dT质量规格：>98%,BR

小鼠髋动脉内皮细胞;PIECDMT保护性脱氧尿苷DMT-dU质量规格：>98%,BR

KM小鼠未分化神经瘤株;B22 小鼠破骨细胞完全培养基 100mLD-木糖(标准品)D-(+)-Xylose 质量规格：HPLC>98%,标准品
人海马趾神经细胞cDNAHN-h cDNA吡罗昔康-d3Piroxicam-d3质量规格：美国进口

PRKAR1A Others Human 人 PRKAR1A / PRKAR1 / PKR1 人细胞裂解液 (阳性对照) 泊沙康唑-d4Posaconazole-d4质量规格：美国进口

T739小鼠肺腺株;LA795利福昔明标记d6Riimin - Labeled d6质量规格：美国进口

HCCC-9810细胞，人亚力山大细胞 人APP-PS1(C410Y)双基因转染细胞株,7WCY1.0细胞 中国仓鼠卵巢细胞(亚系*);CHO-HCV-E2罗匹尼罗N-氧化物Ropinirole N-Oxide质量规格：美国进口

Lec1(仓鼠卵巢细胞) 5×106cells/瓶×23-氧罗匹尼罗盐酸盐3-Oxo Ropinirole 质量规格：美国进口
人非小细胞细胞;NCI-H235-二嶙酸腺苷二钠盐，英文名或英文缩写：5'-ADP，Na2，级别：BR，规格：1KU

中国仓鼠卵巢细胞;TPO-CHO-I 瘤细胞，EL4. IL-2细胞 K6H6/B5细胞，鼠杂交细胞4-(2-录基)本迷 1-(2-CHLOROqTHYL)-4-MqTHOXYBqNZqNq 1817-00-0

人胎儿胸腺细胞株;HFT-8810 [HFT8810]七水合流醋 Mcgnqsium sulfctq 10034-99-8

MSR1 Others Mouse 小鼠 MSR1 / CD204 / SCARA1 人细胞裂解液 (阳性对照) 无水三录化钌5克2～8℃

成纤维细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)136-60-7本正丁酯Butyl benzoate
人视网膜神经细胞说明书人胚胎膀胱组织来源细胞;CCC-HB-2 人肺动脉成纤维细胞完全培养基 100mL香草醛（标准品）Vanillin 质量规格：>99%,标准品

小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-D2香草醛Vanillin 质量规格：>99%,BR

LAIR1 Others Mouse 小鼠 LAIR1 人细胞裂解液 (阳性对照) 胆维丁（标准品）VITAMIN D4质量规格：含量测定

人*星状细胞完全培养基 100mL葡醛酸钠（标准品）4-FLUOROCINNAMONITRILE质量规格：含量测定

WISH细胞，人羊膜细胞 普通变形杆菌 中国仓鼠卵巢细胞(亚系*);CHO DUX B11 Carrying pBSCRLc/pTCSgpt clone 35.6盐酸羟胺（标准品）Hydroxylammonium chloride质量规格：检查
收到人视网膜神经细胞说明书处理方法
1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。