人神经母细胞瘤细胞说明书冷冻保存细胞之方法：

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
细胞冻存步骤：

资源名称　人神经母细胞瘤细胞说明书
种属：LAN-1

模式：菌株未知
细胞分类：
第一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：产品仅用于科研
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞培养过程：

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。
以下是人神经母细胞瘤细胞说明书的相关热销产品：
MICA Others Human 人 MICA 人细胞裂解液 (阳性对照) 镨标准溶液(1000μg/mL,基体：10%HCl)质量规格：1000μg/mL,基体：10%HClPraseodymium standard

HES 人胚皮肤成纤维样细胞钨标准溶液(1000μg/ml,基体：0.1mol/LNaOH)质量规格：1000μg/ml,基体：0.1mol/LNaOHTungsten solution

CM-R051大鼠子宫颈上皮细胞完全培养基100mL依托咪酯(标准品)质量规格：>98%,标准品Etomidate

AGS人胃腺癌细胞N-乙酰神经氨酸/唾液酸质量规格：度≥98.0%N-Acetyl Neuraminic Acid/NANA/Neu5Ac/SA

EB病毒转化的人B细胞;HH-16 人脑静脉血管平滑肌细胞完全培养基 100mL红霉素质量规格：≥850 μg/mg,BRErythromycin
HEPG2.2.15 肝癌细胞HBV病毒株草酰乙酸Oxaloacetic acid质量规格：>97%,BR

CL-0290MDA-MB-468(人癌细胞)5×106cells/瓶×2硫酸锌七水(AR) sulfate, heptahydrate质量规格：>99.5%,AR

RLF, 大鼠成纤维细胞1酸钾钠四水Potassium  tatrate, tetrahydrate质量规格：>98%,BR

双位点HC-kit受体细胞株;DMF7 人子宫内膜上皮细胞完全培养基 100mL缩二脲Biuret质量规格：>98%,BR

人脊髓星形胶质细胞总RNAHA-sp NA硫酸镁无水(分子生物学级)Magnesium sulfate anhydrous质量规格：>99%,分子生物学级
绵羊肺细胞;OAR-L1甘油激酶，英文名或英文缩写：Glycerokinase，级别：BR，5′d(NNN NNN NNN N)3′，规格：100克

IL12A & IL12B Others Mouse 小鼠 IL12A & IL12B Heterodimer 人细胞裂解液 (阳性对照) 苦参碱 Matrine (HPLC,≥98%) 16837-52-8 5G 标准品

IMR-32 人神经母细胞瘤细胞拂化本 Fluorobqnzqnq 1946/6/6

CEM/C1人急性细胞白血病细胞 CEM/C1 human acute lymphoblastic leukemia cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS二硫代赤藓糖醇，英文名或英文缩写：DTE，级别：试剂级，98%，规格：1KU

VEGFA Protein Mouse 重组小鼠 VEGFA / VEGF164 蛋白硅酮　OV-210SILICONE OV-210
人神经母细胞瘤细胞说明书CD276 Others Human 人 CD276 / B7-H3 人细胞裂解液 (阳性对照) 硫锌酸Alphalipoic acid质量规格：>98%

L929 小鼠成纤维细胞硫辛酸（标准品）Alphalipoic acid质量规格：HPLC≥98%，标准品

CM-H043人肝实质细胞完全培养基100mL盐酸氨溴索Ambroxol HCl质量规格：>98%,BR

SK-MEL-1, 人皮肤色素瘤细胞盐酸氨溴索(标准品)Ambroxol HCl质量规格：含量测定

人神经母细胞瘤细胞;SH-SY5Y 人牙周膜成纤维细胞完全培养基 100mL氨1汀（三水）Amifostine质量规格：干品Purity≥98.0%
收到人神经母细胞瘤细胞说明书处理方法
产品仅用于科研1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。