杂交瘤(抗CD3)说明书冷冻保存细胞之方法：

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
细胞冻存步骤：

资源名称　杂交瘤(抗CD3)说明书
种属:OKT 3

类型:细胞类型:：杂交瘤；B淋巴细胞

形态:淋巴母细胞

培养方法

培养基:IMDM培养基(GIBCO,货号12200036)，80%；优质胎牛血清，20%。 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度。

生长特性:半贴壁生长
细胞分类：
第一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：产品仅用于科研
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞培养过程：

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。
以下是杂交瘤(抗CD3)说明书的相关热销产品：
MME Others Human 人 CD10 / MME / Neprilysin 人细胞裂解液 (阳性对照) 盐酸哌罗匹隆质量规格：>98%,BRPerospirone

SK-MEL-1, 人皮肤色素瘤细胞替拉扎明质量规格：>98%Tirapazamine(SR259075; Win59075; SR4233)

SIGLEC5 Others Human 人 SIGLEC5 人细胞裂解液 (阳性对照) 癸酸甲酯(Standard for GC ,≥99.5%(GC))质量规格：Standard for GC ,≥99.5%(GC)Methyl decanoate

人胚肺二倍体细胞;HEL-1甲酯(Standard for GC,≥99.5%(GC))质量规格：Standard for GC,≥99.5%(GC)Methyl laurate

HK-2细胞，人肾小管近段上皮细胞 负鼠肾细胞,OK细胞 CL-0389NCI-H1688(人典型小细胞细胞)5×106cells/瓶×2棕榈酸甲酯(Standard for GC,≥98.0%(GC))质量规格：Standard for GC,≥98.0%(GC)Methyl palmitate
CM-H135人脉络膜微细胞完全培养基100mL五水合硫酸金雀花碱/硫酸鹰爪豆碱质量规格：≥97%,BR(-)-Sparteini Sulfas

DPYS Others Human 人 DPYS / Dihydropyrimidinase 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 辛弗林(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品Synephrine

人*内皮细胞HSEC泛昔洛韦（标准品）质量规格：HPLC≥99%,标准品Famciclovir

非洲绿猴肾细胞(SV40转化);COS-1 [COS1] 转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞，293细胞 QGY-7703(细胞)氟达拉滨1酸酯质量规格：>98.5%,USP,BRFludarabine Phosphate

人细胞;A549 [A-549]喷昔洛韦质量规格：>98%,BR,细胞培养级Penciclovir
EPCAM Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 EpCAM / OP-1 / TACSTD1 人细胞裂解液 (阳性对照) Crovatin质量规格：HPLC≥98%，标准品Crovatin

人细胞;A549 [A-549]Croverin质量规格：HPLC≥98%，标准品Croverin

家猫肾细胞;CATK1 肝细胞，HL-7702细胞 MMQ细胞，大鼠细胞levatin质量规格：HPLC≥98%，标准品levatin

人脐内皮细胞;HUV-EC-C苍耳亭（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品 Xanthatin

RBP4 Others Mouse 小鼠 RBP4 人细胞裂解液 (阳性对照) PR171关键中间体I 质量规格：>97%PR171 intermedaite I
杂交瘤(抗CD3)说明书SIGIRR Others Human 人 SIGIRR / TIR8 人细胞裂解液 (阳性对照) 磺胺噻唑钠盐Sulfathiazole  salt质量规格：美国进口

人脐内皮细胞;HUV-EC匹格列酮-d4Pioglitazone-d4质量规格：美国进口

PSG6 Others Human 人 PSG6 / PSG10 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 羟基匹格列酮（M-Ⅶ）Hydroxy Pioglitazone (M-VII)质量规格：美国进口

CL-0302PA319(人细胞)5×106cells/瓶×25-去乙基5-羧基匹格列酮5-Desethyl 5-Carboxy Pioglitazone质量规格：美国进口

GC-1, 鼠精原细胞 swiss鼠胚胎成纤维细胞，3T3 swiss细胞 NCL-H548(人*癌细胞)酮基匹格列酮（M-Ⅲ）Keto Pioglitazone (M-III)质量规格：美国进口
收到杂交瘤(抗CD3)说明书处理方法
产品仅用于科研1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。