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小鼠胚胎干细胞RW.4(干细胞库保藏)
  • 品牌:莼试
  • 产地:进口、国产
  • 货号:CSX4444
  • 发布日期: 2020-06-10
  • 更新日期: 2024-02-23
产品详请
产地 进口、国产
品牌 莼试
货号 CSX4444
组织来源 详见说明书
细胞形态 球形克隆
是否是肿瘤细胞
规格 详见说明书
保质期 详见说明书
器官来源 详见说明书
免疫类型 详见说明书
品系 详见说明书
用途范围 公司产品仅用于科研
生长状态 小鼠胚胎内细胞团
物种来源 详见说明书
纯度 详见说明书%
是否进口

资源名称 小鼠胚胎干细胞RW.4(干细胞库保藏)产品仅用于科研
种属:RW.4

类型:小鼠胚胎内细胞团

形态:球形*

培养方法

培养基:mES完全培养液配方(600 ml): DMEM (Invitrogen 12430) 497 ml ESFBS (biochrom S4115) 90 ml Glutamax (Invitrogen 35050) 6 ml NEAA (Invitrogen 11140) 6 ml LIF (Millipore ESG1107) 60 μl(终浓度为1000U/ml β-Mer (Invitrogen 21985) 1.5 ml 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度。
小鼠胚胎干细胞RW.4(干细胞库保藏) 来源可靠(源于ATCCECACCDSMZJCRB等知名品牌),活力>95%,贴壁性好。我们从试剂、包被器皿、冻存原代细胞、新鲜原代细胞、原代细胞的分子学实验等提供全程服务。我司拥有专业的实验室,可无菌操作并提供相关科研项目解决方案以及实验服务。

产品名称

类型

佛号

小鼠胚胎干细胞RW.4(干细胞库保藏)

小鼠胚胎内细胞团

CSX4444


培养操作步骤:
小鼠胚胎干细胞RW.4(干细胞库保藏) 1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布; 
2
.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片); 
3
.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时; 
4
.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中; 
5
.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 
细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.
研究条件可以人为控制
pH
、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.
研究的样本可以达到比较均一性通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用*化等方法使细胞达到纯化。
4.
研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备  记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。
5.
研究的范围比较广泛
应用的学科领域较为宽广,如细胞学、免疫学、学、生物化学、遗传学、分子生物学等; 
适用的对象范围广,从低等动物到高等动物,一种动物的不同年龄阶段以及不同组织,都可进行有针对性的研究。
6.
研究的费用相对较经济可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。

操作流程:
产品仅用于科研1.1主要试剂与仪器:倒置相差显微镜(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293
细胞的复苏培养传代及冻存:
1.2.1
细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液(37预热,810倍体积)离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内,在375co2及饱和湿度下培养。
1.2.2
细胞传代 原代培养的hek293细胞48h换液1次,细胞长至60%70%融合时,用0.25%胰酶消化12min,将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散,为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次,获得细胞悬液,然后加入倍量的培养基,温和混匀,吸管分装混合液,传代扩增细胞。
1.3
细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4
细胞的计数 常规消化细胞,待细胞变圆、脱壁并浮起,加入少量培养基离心,再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液,用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数,按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液=(四方格细胞数之和/4) ×104
1.5
细胞的贴壁率 指数生长期的细胞,以0.25%胰酶消化成单细胞悬液,计数后分别接种于1225cm2培养瓶中,每两小时随机取出3瓶细胞,吸除培养基及未贴壁细胞,加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞,取其平均值,按照公式:贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100%,计算贴壁率。 
1.6
生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液,以1×104/孔接种于24孔板,每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔,计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d,绘制细胞生长曲线

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