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产品分类
小鼠胚胎干细胞E14TG2A(干细胞库保藏)形态
小鼠胚胎干细胞E14TG2A(干细胞库保藏)形态
物品单位 品牌
莼试
  • 产地:进口、国产
  • 货号:CSX4449
  • 发布日期: 2020-06-10
  • 更新日期: 2020-12-15
产品详细说明
产地 进口、国产
保存条件
品牌 莼试
货号 CSX4449
组织来源 详见说明书
细胞形态 球形克隆
是否是肿瘤细胞
CAS编号
规格 详见说明书
保质期 详见说明书
器官来源 详见说明书
免疫类型 详见说明书
品系 详见说明书
用途范围 公司产品仅用于科研
生长状态 小鼠胚胎内细胞团
物种来源 详见说明书
纯度 详见说明书%
是否进口

细胞培养过程:

产品仅用于科研冷冻保存细胞之方法:
小鼠胚胎干细胞E14TG2A(干细胞库保藏)形态冷冻保存方法一: 冷冻管置于4 30~60 分钟-20 30 分钟* → -80 16~18 小时(或隔夜)液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 –80 以下, 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

资源名称 小鼠胚胎干细胞E14TG2A(干细胞库保藏)形态
种属:E14TG2A

类型:小鼠胚胎内细胞团

形态:球形*

培养方法

培养基:mES完全培养液配方(600 ml): DMEM (Invitrogen 12430) 497 ml ESFBS (biochrom S4115) 90 ml Glutamax (Invitrogen 35050) 6 ml NEAA (Invitrogen 11140) 6 ml LIF (Millipore ESG1107) 60 μl(终浓度为1000U/ml β-Mer (Invitrogen 21985) 1.5 ml 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度。

细胞分类:
第一种:
是冻存产品,由氮直液接拿出,干冰运输给客户。一般不推荐这种,也较少使用这种方式,因为复苏手法对于细胞状态影响较大,一旦细胞状态不好,很难说是细胞自身不行,还是复苏没操作好;另外温度对细胞、基因功能状态影响很大,也不是细胞储存的zui好方式,快递时间也很难控制,多种因素影响产品的质量;干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)
第二种:
是我们复苏好细胞,QC通过后,T-25灌满培养基常温运输给客户,排除复苏造成影响,常温运输也对细胞影响也不大,只需加25元运费(顺丰)
质量保证:我们的细胞株来源于ATCCECACCDSMZJCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。
细胞冻存步骤:

细胞培养步骤:
产品仅用于科研一.培养基及培养冻存条件准备:
1
)准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)85%;北美胎牛血清(United StatesGIBCO,货号16000-044)15%
2
)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5% 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%
3
)冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二.细胞处理:
1
)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2
)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1.
弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.
2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.
6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4.
将细胞悬液按1215的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3
)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。

收到小鼠胚胎干细胞E14TG2A(干细胞库保藏)形态处理方法
1
、首先,观察细胞培养瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有,请拍照,并及时与技术支持联系(所拍照片将作为后续服务依据)。
2
、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落;先不要打开培养瓶盖,将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时,以便稳定细胞状态。
3
、仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如贴壁特性(贴壁/悬浮)、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4
、静置完成后,取出细胞培养瓶,镜检、拍照,记录细胞状态(所拍照片将作为后续服务依据);建议细胞传代培养后,定期拍照、记录细胞生长状态。
5
、贴壁细胞:若细胞生长密度超过80%,可正常传代;若未超过80%,移除细胞培养瓶内培养基,预留5ml左右继续培养,直至细胞密度达80%左右再进行传代操作,瓶盖可稍微拧松。
6
、悬浮细胞:将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内,1200rpm离心5min,离心后上清培养基可收集备用,管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时,若细胞密度超过80%,可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养,补加培养基至5ml;若细胞密度未超过80%,将细胞悬液移至原瓶继续培养,直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。
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