1. 将450ul 标本稀释液加入到一支 1.5ml 进口聚丙烯管中 , 再加 10ul 血清或血浆标本。
2. 加20ul 1 N HC I ,盖紧，上下混匀。 2 － 8 ℃ 放置60± 2 分钟。
3. 加20ul 1 N NaOH, 盖紧，上下混匀。
4. 即用，或放-20/-70 ℃ 保存3 天。计算结果时乘 以稀释倍数 50 。 （ 注意：不同的标本E2F1 的水平可能有较大差异，请根据实际情况灵活掌握稀释度）
5. 细胞培养上清或组织匀浆 10 倍稀释 (410ul 的标本稀释液＋ 50ul 样本＋ 20ul 的 1N HCI+20ul 的 1N NaOH) 。
结果计算与判断
1. 所有 OD 值都应减除空白值后再行计算。
2. 以标准品20 00 、100 0 、500 、 250 、 125 、 62.5 、 31.2 、 0 pg /ml 为横坐标， OD 值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。
3. 根据样品 OD 值在该曲线图上查出相应 E2F1 含量 ，再乘上稀释倍数即可 。
试剂盒性能
1. 灵敏度 ： 最小的E2F1 检测浓度小于 15 pg/ml。
2. 特异性： 可同时检测重组或天然的人 E2F1 。 不与 人其它细胞因子有交叉反应。
3. 重复性：板内、板见变异系数均小于8.9％。
小鼠B淋巴细胞杂交瘤细胞；SH3
仓鼠/小鼠杂交瘤细胞；145-2C11
小鼠黑色素瘤细胞；B16
小鼠T淋巴细胞；Cl.Ly1+2-/9
小鼠单核巨噬细胞；J774A.1
小鼠肾集合管细胞(SV40转化)；M-1
绿色荧光蛋白标记小鼠前胃癌细胞；MFC-GFP
小鼠肾足细胞；Mouse podocyte
小鼠淋巴瘤细胞；P388D1(IL-1)
小鼠子宫颈癌细胞；U14
绿色荧光蛋白标记小鼠子宫颈癌细胞；U14-GFP
小鼠浆细胞瘤；MPC-11
小鼠胚胎成纤维细胞；PA317
转PYTL基因小鼠睾丸支持细胞；15P-1
BALB/C小鼠肝上皮细胞；BNL 1ME A.7R.1
小鼠结肠癌细胞；CT26.WT [CT26WT]
小鼠睾丸畸胎瘤细胞；F9
小鼠网织细胞肉瘤；M5076
小鼠正常肝细胞；NCTC 1469 [NCTC1469]
小鼠神经母细胞瘤细胞；Neuro-2a [N2a; Neuro-2a]
正常小鼠睾丸Leydig细胞；TM3
正常小鼠睾丸Sertoli细胞；TM4
615小鼠乳腺癌瘤株；Ca759
615小鼠乳腺癌瘤株；Ca761
615小鼠乳腺癌瘤株；Ca763
615小鼠T细胞性白血病瘤株；L7712
615小鼠T细胞性白血病瘤株；L7912
615小鼠肺癌瘤株；HP615
615小鼠滑膜肉瘤瘤株；ZM755
615小鼠乳头状肺腺癌瘤株；P615
小鼠肝癌瘤株；H22
615小鼠前胃癌瘤株；Fc
KM小鼠子宫颈癌瘤株；U14
KM小鼠子宫颈癌瘤株；U27
KM小鼠网织细胞肉瘤瘤株；LⅡ
