如何传代小鼠肺泡巨噬细胞系MH-S

小鼠肺泡巨噬细胞系MH-S的传代建议采用1:2至1:4的比例，细胞呈半贴壁半悬浮生长，需同时收集悬浮细胞与消化贴壁细胞，推荐使用0.25%胰酶-EDTA在37℃消化1-3分钟。
MH-S细胞对胰酶较为敏感，操作时需密切观察消化状态，避免过度消化导致细胞损伤。以下是具体传代步骤：
MH-S细胞传代流程：
准备阶段
提前将完全培养基、PBS和胰酶-EDTA溶液于37℃预热，确保操作时温度适宜 。
收集悬浮细胞
轻轻摇晃培养瓶，将悬浮的活细胞转移至离心管中，1000 rpm离心5分钟，弃上清，用少量完全培养基重悬备用 。
处理贴壁细胞
弃去原培养基，用不含钙、镁离子的PBS轻柔润洗1-2次，去除残留血清以提高消化效率。
加入适量0.25%胰酶-EDTA（T25瓶加1 mL），37℃孵育1-2分钟 。
显微镜下观察：当细胞间隙变大、形态变圆并开始脱落时，立即终止消化。
终止消化与混匀
加入含10% FBS的完全培养基终止反应，轻柔吹打使细胞充分分散，避免成团。将消化液与之前收集的悬浮细胞合并，1000 rpm离心5分钟，弃上清后用新鲜培养基重悬 。
接种与培养
按1:2至1:4比例接种至新培养瓶，补加6-8 mL完全培养基（RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S + 0.05 mM β-巯基乙醇），置于37℃、5% CO?培养箱中培养 。
注意事项
MH-S细胞贴壁不牢，运输或操作中易脱落，属正常现象，离心回收即可 。
消化时间宜短，控制在2分钟内为佳，过长可能导致细胞贴壁能力下降 。
初次传代建议保留部分原培养基，帮助细胞适应新环境 。