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蛋白磷酸酶抑制剂混合液反应五要素

 

蛋白磷酸酶抑制剂混合液反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。

内吞作用辅助蛋白EPN1抗体
内吞作用辅助蛋白EPN2抗体
内质网定位蛋白ERGI3抗体
内质网氧化物蛋白Ero1-Lα抗体
内质网蛋白ERp19抗体
内质网蛋白ERp72抗体
结核分枝杆菌分泌性蛋白ESAT6抗体
真核翻译起始因子1抗体
上皮粘连调控蛋白ESRP2抗体
T细胞和嗜酸性粒细胞表达特应性皮炎蛋白ETEA抗体
电子转移黄素蛋白脱氢酶抗体
EGF毒素受体7跨膜结构域蛋白1抗体
乙醇胺激酶2抗体
磷酸化Ets转录因子家族ets1抗体
磷酸化上皮细胞癌转化蛋白2抗体
嗜酸性粒细胞过氧化物酶抗体
核酸内切酶G抗体
酪氨酸蛋白激酶受体A10抗体
胞吐囊复合体蛋白2抗体
磷酸化4E结合蛋白1抗体
磷酸化丝裂原活化蛋白激酶1/2抗体
泛素交联酶抗体
EB病毒核抗原抗体-3B抗体