实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。
1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。
3. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
4. 每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液） 100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。
5. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。
7. 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
假交替单胞菌
鼠李糖乳杆菌
双歧双歧杆菌
粘质沙雷氏菌
噬糖盐红菌
师岗链霉菌
委内瑞拉链霉菌
枯草芽孢杆菌
弯曲芽孢杆菌
缺陷短波单胞菌
副凝聚短状杆菌
氧化微杆菌
硝基还原假单胞菌
肺炎克雷伯氏菌
成团肠杆菌(成团泛菌)
乙酸钙不动杆菌
成团肠杆菌
琼氏不动杆菌
尿肠球菌
铜绿假单胞菌
阿尔莱特葡萄球菌
地衣形芽孢杆菌
米氏硫胺素芽孢杆菌
溶酪葡萄球菌
调料葡萄球菌
法氏柠檬酸杆菌
发酵乳杆菌
抗辐射不动杆菌
巴氏葡萄球菌
