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海藻糖酶(TREH)真核蛋白实验原理

 

海藻糖酶(TREH)真核蛋白实验原理
将海藻糖酶(TREH)抗体包被于96孔微孔板中,制成固相载体,向微孔中分别加入标准品或标本,其中的海藻糖酶(TREH)与连接于固相载体上的抗体结合,然后加入生物素化的海藻糖酶(TREH)抗体,将未结合的生物素化抗体洗净后,加入HRP标记的亲和素,再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的海藻糖酶(TREH)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值),计算样品浓度。
实验流程
1. 实验前标准品、试剂及样本的准备;
2. 加样(标准品及样本)100μL,37°C孵育1小时;
3. 吸弃,加检测溶液A100μL,37°C孵育1小时;
4. 洗板3次;
5. 加检测溶液B100μL,37°C孵育30分钟;
6. 洗板5次;
7. 加TMB底物90μL,37°C孵育10-20分钟;

8. 加终止液50μL,立即450nm读数。

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