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CD134分子ELISA检测试剂盒标本的采集与保存

 

CD134分子ELISA检测试剂盒标本的采集与保存:
1、血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2 小时或4oC 过夜,然后1000×g 离心20 分钟,取上清即
可,或将上清置于-20oC 或-80oC 保存,但应避免反复冻融。
2、血浆:用EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30 分钟内于2-8oC 1000×g 离心15 分钟,
取上清即可检测,或将上清置于-20oC 或-80oC 保存,但应避免反复冻融。
3、组织匀浆:
1) 取适量组织块,于预冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液,称重后备用(组织块较大需先剪碎后再匀浆);
2) 可同时选用多种匀浆方法达到较好的破碎效果:首先将组织块移入玻璃匀浆器,加入5-10mL 预冷PBS 进行充分研磨,该过程需在冰上进行(有条件实验室可选用机器匀浆);得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融进一步处理(超声破碎过程中注意冰浴降温;反复冻融法可重复2 次)。
3) 将制备好的匀浆液于5000×g 离心5 分钟,留取上清即可检测。
4、其它生物标本:请1000×g 离心20 分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20oC 或-80oC 保存,但应避免反复冻融。
操作步骤:
夹心法,一般的操作步骤为:
将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体;
加入待测检体,检体中若含有待测的抗原,则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结;
洗去多余待测检体,加入另一种对抗原专一的一次抗体,与待测抗原进行键结;
洗去多余未键结一次抗体,加入带有酶的二次抗体,与一次抗体键结;
洗去多余未键结二次抗体,加入酶底物使酵素呈色,以肉眼或仪器读取呈色结果;
间接法,一般的操作步骤为:
将已知的抗原固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余的抗原。
加入待测检体,检体中若含有待测的一次抗体,则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结。
洗去多余待测检体,加入带有酶的二次抗体,与待测的一次抗体键结。
洗去多余未键结二次抗体,加入酶底物使酶呈色,藉仪器测定塑胶盘中的吸光值,以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。
竞争法,其操作步骤为:
将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体
加入待测检体,使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结
加入带有酶的抗原,此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结,由于塑胶孔盘上固著的抗体数量有限,因此当检体中抗原的量越多,则带有酶的抗原可键结的固著抗体就越少,亦即,两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结,即所谓竞争法之由来。