人可溶性髓系细胞触发受体-1ELISA试剂盒实验操作步骤内容

人可溶性髓系细胞触发受体-1ELISA试剂盒实验操作步骤内容：

实验操作流程
1. 样本预处理
待测血清或血浆样本需在4℃条件下以3000rpm离心10分钟，去除纤维蛋白原及细胞碎片。脑脊液等特殊样本需经0.22μm滤膜过滤，避免颗粒物干扰。建议所有样本分装后-80℃保存，避免反复冻融。

2. 试剂准备
将20×洗涤液用超纯水按1:19稀释，静置至室温后使用。标准品需加入1mL样本稀释液进行梯度复溶，依次稀释至0.5-60ng/mL的7个浓度梯度，每步稀释需涡旋混匀30秒。

3. 加样与孵育
使用排枪向预包被板孔中加入50μL标准品或待测样本，随即加入50μL生物素标记抗体工作液。覆膜后37℃孵育45分钟，注意避免光线直射。首次实验建议设置复孔（n≥3），并预留空白对照孔。

4. 洗涤与显色
弃去液体后在吸水纸上拍干，每孔加入350μL洗涤液，静置1分钟后弃液，重复5次。加入TMB显色底物100μL/孔，25℃避光反应15分钟，当最高浓度标准品出现明显蓝色时立即终止。

关键注意事项
1. 温控精度显著影响结果稳定性，建议使用模块化恒温孵育箱。
2. 洗涤环节是降低非特异性结合的关键，建议使用自动洗板机并确保洗液注满孔底。
3. 对于OD值超出标准曲线范围的样本，需用稀释液作10-100倍稀释后重测。

数据分析要点
使用四参数logistic曲线拟合标准品浓度-OD值关系，计算R2应＞0.99。建议采用专业ELISA分析软件（如SoftMax Pro）自动计算样本浓度，异常值需结合临床病史判断是否剔除。