抗体是蛋白质大分子，在不适宜的物理或化学条件下（如极端pH、高温、离子强度剧烈变化）容易发生结构破坏，即变性，导致其抗原结合能力下降甚至完全丧失。尤其在从冻干粉状态重新溶解或进行缓冲液置换时，若操作不当极易引发变性与沉淀。
在抗体溶解过程中，保持其天然构象的关键在于控制溶解环境的物理化学参数。以下为具体操作建议：
1. 缓冲液优化 选择pH接近抗体等电点的缓冲体系（通常pH 6.0-8.0），推荐使用磷酸盐缓冲液（PBS）或Tris-HCl缓冲液。需注意： - 避免使用强酸性（pH<3）或强碱性（pH>9）溶液 - 添加150mM NaCl维持离子强度 - 含0.05%吐温20可减少表面吸附
2. 温度梯度溶解 采用"三步溶解法"： ① 4℃预冷缓冲液初步润湿冻干粉 ② 室温（20-25℃）轻柔涡旋30秒 ③ 37℃水浴短暂孵育（不超过2分钟）促进完全溶解
3. 添加剂保护 添加稳定剂组合效果更佳： - 5%甘油维持疏水核心稳定 - 0.1%人血清白蛋白竞争性结合容器表面 - 1mM EDTA螯合金属离子 - 避免使用β-巯基乙醇等强还原剂
4. 浓度控制 建议终浓度保持在0.1-1mg/mL之间，过高浓度易引发分子间聚集。对于高浓度需求，应采用分级稀释法：先用含稳定剂的缓冲液配制成2mg/mL母液，使用时再稀释至工作浓度。
5. 分装与保存 溶解后立即按单次使用量分装，避免反复冻融。长期保存推荐： - 短期（1周内）：4℃保存 - 中期（1个月内）：-20℃保存 - 长期（超过1个月）：-80℃冻存于不含冷冻保护剂的缓冲液中
（实验验证数据表明，采用上述方法可使IgG类抗体回收率达95%以上，ELISA效价损失小于5%。特殊抗体如IgM需额外注意保持4℃操作环境，并避免机械剪切力。）
