加标回收率测试的具体操作步骤是什么

加标回收率测试是ELISA实验里验证数据可靠性的关键一步，核心就一句话：?在已知样本里加入定量标准品，测回收率看方法准不准?。

?一、加标回收率测试的操作步骤?
?样品准备?：取至少两份完全相同的待测样本（比如血清或细胞裂解液）。
?加标操作?：其中一份（加标组）加入已知浓度的GLUT1标准品，另一份（未加标组）不加，作为本底对照。
?同步处理?：两份样本?完全相同?地经历后续所有步骤（稀释、加样、孵育、洗涤、显色等）。
?检测与计算?：
测得未加标组的浓度为 C1。
测得加标组的浓度为 C2。
加入的标准物质理论浓度为 C3。
?加标回收率(%) = [(C2 - C1) / C3] × 100%?
?二、关键注意事项?
?加标量?：通常控制在待测物含量的0.5-3倍内，保证加标后浓度在试剂盒线性范围内。
?加标物形态?：最好和待测物形态一致（比如都用标准品溶液）。
?平行实验?：建议至少做6次重复，保证统计可靠性。
?加标后测定值?：不应超出方法测定上限的90%。
?三、如何判断结果是否合格?
?合格标准?：回收率在 ?80%-120%? 之间通常认为可接受。
?偏低（<80%）?：可能样品处理有损失或基质抑制了反应。
?偏高（>120%）?：可能加标不准确或存在非特异性干扰。
?四、在GLUT1 ELISA中的应用?
?验证试剂盒?：用你的实际样本（如血清、组织匀浆）做加标回收，比说明书上的理论灵敏度更靠谱。
?优化方法?：如果回收率不理想，可以调整封闭条件、洗涤次数或样本稀释液来优化。
?五、与空白加标回收率的区别?
?空白加标回收?：在?不含待测物的空白基质?（如生理盐水）中加标，主要评估?实验条件和仪器性能?。
?样品加标回收?：在?含有待测物的实际样本?中加标，评估?分析方法与基体的兼容性?，更能反映真实情况。
?总结?：做加标回收率测试，记住"两份一样、一份加标、同步处理、算回收率"这四步，重点关注回收率是否在80%-120%之间。