空肠弯曲菌核酸检测的阴性对照设置是确保检测结果准确性和排除实验过程污染的关键环节。?必须设置阴性对照，并参与从DNA提取到PCR扩增的全过程，以监控是否存在环境污染或试剂污染?。
一、阴性对照的类型与作用
?阴性对照（Negative Control, NTC）?
使用已知不含空肠弯曲菌的无菌物质（如无菌水、生理盐水或阴性基质样本）作为模板；
目的是验证整个检测流程中是否引入外源性DNA污染；
若阴性对照出现阳性结果（即扩增曲线呈“S”型且Ct值≤40），说明实验系统存在污染，本次检测结果无效。
?空白对照（No Template Control, NTC）?
在PCR反应体系中以无菌水替代模板DNA；
主要用于检测试剂或耗材是否被扩增产物污染；
通常与阴性对照并列设置，增强污染监控能力。
二、阴性对照的具体设置方法
步骤 操作要求
?1. 样本提取阶段? 将阴性对照（如无菌水）与待测样本一同进行DNA提取，确保其经历相同的处理流程，以监控提取过程中的交叉污染。
?2. 反应体系配制? 在配液区，将提取后的阴性对照DNA加入PCR反应体系中，与其他样本同步进行扩增。
?3. 加样位置安排? 阴性对照应设置在样本板的边缘孔或独立孔位，避免因加样误差影响其他样本。
?4. 扩增程序运行? 与待测样本一同放入荧光PCR仪，使用相同扩增程序。
推荐：每批次检测至少设置一个阴性对照，高通量检测时可适当增加重复数。
三、结果判读标准
?有效实验的前提?：
阴性对照应无Ct值或Ct > 35，且扩增曲线为直线或轻微斜线，无指数增长期；
若阴性对照出现典型扩增曲线（Ct ≤ 35），则判定为污染，实验无效，需重新检测并排查污染源。
?污染排查建议?：
检查试剂是否被污染（尤其是预混液和反应液）；
检查移液器、离心机、生物安全柜是否清洁；
检查操作人员是否遵守分区规范和无菌操作流程。
