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漏斗状带绦虫探针法荧光定量PCR检测试剂盒实验步骤

 

漏斗状带绦虫探针法荧光定量PCR检测试剂盒实验步骤
①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其完全溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。

实验通用规则:
1、洗液不够时,可用蒸水自行配制PH7.4,0.02M的酸爱中液,加入0,1%的吐温
20作为洗液。加入1/1000的?氮钢后可长期保存
2.液全部完后,可将璃示版在桌子上平行経动30,混匀液に、也可以用時示的是
3、底物有一定的毒性,终止液对反肤有蚀性,应尽量造免接驶。
4、盈测前,要打开酶示仪,使之稳定10分钟以上:
5、吸取液依时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差。
8、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使青洗更加底。没有洗板机时,制去液体后,要将奪标板在振或毛纸上用力治干。
9、用枪吸取液时速度不能太侠,以兔产生气泡而使吸取?不住确。
10、底物是光感的,要在临用前现。

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